同位素標記定量
iTRAQ(isobaric Tags for Relative and Absolute Quantitation)&TMT(Tandem Mass Tags)分別由AB Sciex公司和Thermo公司研發(fā)的多肽體外標記定量技術,利用多種同位素試劑標記蛋白多肽N末端或者賴氨酸側鏈基團,不同分子量的試劑對不同來源的樣品進行標記從而實現(xiàn)不同樣品間蛋白質組的比較。
iTRAQ/TMT試劑由三部分組成:報告基團、平衡基團和反應基團。反應基團形成2-10種等質量同位素標簽。iTRAQ/TMT試劑標記酶解后的肽段,可與氨基酸N端及側鏈的伯胺基團發(fā)生反應。在一級譜圖中,來自于不同樣本的同一肽段,標記后表現(xiàn)為相同的質荷比。在二級譜圖中,報告基團、平衡基團和反應基團之間的鍵斷裂,帶不同同位素標簽的同一肽段產(chǎn)生質量不同的報告離子,根據(jù)報告離子的豐度可獲得樣本間相同肽段的定量信息,再經(jīng)過軟件處理得到蛋白質的定量信息。
iTRAQ實驗步驟
1. 樣品制備
2. 酶解消化
3. iTRAQ標記:
4. 樣本混合/肽段分級
5. 數(shù)據(jù)處理及生信分析
結果展示
火山圖
實驗周期及交付標準
1. 實驗周期:6周左右
2. 交付標準:蛋白定量結果、鑒定結果、質譜原始數(shù)據(jù)、生信分析結果(GO分析、KEGG分析等等)
需確認的信息
1. 樣本的種屬
2. 樣本的類型(組織or細胞or血液)
3. 樣本的數(shù)量及分組
4. 分析要求
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