一、產(chǎn)品簡介：

ABTS 在適當(dāng)?shù)难趸瘎┳饔孟卵趸删G色的 ABTS+，在抗氧化物存在時 ABTS+的產(chǎn)生會被抑制，在 734nm 或 414nm 測定ABTS+的吸光度即可測定并計算出樣品的總抗氧化能力。Trolox 是一種wei生素 E 的類似物，具有和wei生素 E 相近的抗氧化能力，用作其它抗氧化物總抗氧化能力的參考。

二、試劑盒的組成和配制：

試劑名稱規(guī)格保存要求備注

試劑一粉劑 mg×1 支4℃保存臨用前甩幾下使粉劑落入底部，再

加 1.47mL 蒸餾水，充分溶解備用。

試劑二粉劑 mg×1 支4℃保存臨用前甩幾下使粉劑落入底部，再

加 2.86mL 蒸餾水，充分溶解備用。

標(biāo)準(zhǔn)品液體×1 支4℃保存

若重新做標(biāo)曲，則用到該試劑

工作液配置：臨用前將加水溶解后的試劑一和試劑二按照 1:1 比例混合，避光反應(yīng) 12h 后（二天內(nèi)用完），再用 PBS 或無水乙醇稀釋 40 倍備用，當(dāng)待檢測樣品為水溶性樣品時，用 PBS 稀釋；當(dāng)待檢測樣品為非水溶性樣品時，用 80%乙醇稀釋（最好現(xiàn)配現(xiàn)用）。

三、所需的儀器和用品：

可見分光光度計、1mL 玻璃比色皿（光徑 1cm）、低溫離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、研缽、無水乙醇和蒸餾水。

四、總抗氧化能力測定：

建議正式實驗前選取 2 個樣本做預(yù)測定，熟悉實驗流程，避免實驗樣本和試劑浪費！

注：樣品中不能添加 DTT、巰基乙醇等影響氧化還原反應(yīng)的物質(zhì)，也不宜添加 Tween、Triton 和 NP-40 等去垢劑。

1、樣本制備：

① 組織樣本：

稱取約 0.1g 組織，冰浴低溫勻漿，加入 1mL 的冷 PBS（水溶性樣本）或 80%乙醇（非水溶性樣本），進(jìn)行冰浴勻漿，勻漿后轉(zhuǎn)入離心管中。12000rpm，4℃離心 10min，取上清，置冰上待測。

【注】：若增加樣本量，可按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例進(jìn)行提取

② 液體樣本：直接檢測；若渾濁，離心后取上清檢測。

2、上機(jī)檢測：

可見分光光度計預(yù)熱 30min 以上，調(diào)節(jié)波長至 414nm，蒸餾水調(diào)零。

不同樣本清除能力不一，可先選取 2 個樣本做檢測，若 A 測定-A 對照接近零，需對樣本進(jìn)行稀釋（稀釋液與組織提取液一致，即水溶性樣本用 PBS 或蒸餾水稀釋，非水溶性樣本用 80%乙醇稀釋）后再檢測，稀釋倍數(shù) D 代入公式計算。

在 EP 管中依次加入：

試劑名稱（μL）測定管對照管空白管（做一次）

樣本4040

PBS 或 80%乙醇76040

工作液760760

【注】若一次性樣本較多，可用排槍或者分批檢測，以使測定管的反應(yīng)時間（避光靜置 6min） 保持一致。

五、結(jié)果計算：

1、標(biāo)準(zhǔn)曲線：y = 3.3471x-0.0291，x 是標(biāo)準(zhǔn)品 Trolox 摩爾濃度（μmol/mL），y 是△A。

2、按樣本質(zhì)量計算：

總抗氧化能力(μmol Trolox/g 鮮重)=[(??A+0.0291)÷3.3471×V1]÷(V1÷V×W) ×D

=0.3×(??A+0.0291)÷W×D

3、液體樣本：

總抗氧化能力(μmol Trolox/mL)=[(??A+0.0291)÷3.3471×V1]÷V1×D

=0.3×(??A+0.0291)×D

V----加入提取液體積，1 mL；V1反應(yīng)中樣品體積，40μL=0.04 mL；

W----樣品質(zhì)量，g；Trolox 分子量250.29

附：標(biāo)準(zhǔn)曲線制作過程：

1標(biāo)準(zhǔn)品母液（2mM）。

2把母液用相應(yīng)的提取液稀釋成以下濃度梯度的標(biāo)準(zhǔn)品：0，0.08，0.16，0.24，0.32，

0.4 mM。也可根據(jù)實際樣本來調(diào)整標(biāo)準(zhǔn)品濃度。

3按照測定管加樣體系操作，依據(jù)結(jié)果即可制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。