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培養(yǎng)皿培養(yǎng)細菌時，是用來對細菌進行表面培養(yǎng)的，用的是固體培養(yǎng)基。
先把培養(yǎng)皿滅菌，通常是包裹起來，在140℃左右進行干熱滅菌，時間是18～24小時。
然后配制培養(yǎng)基。最常見的是*培養(yǎng)基，材料用的是牛肉膏、蛋白胨、葡萄糖、NaCl，有時還少加點硫酸鎂和／或硫酸亞鐵。在水中把這些原料按要求的量依次溶解混合，再按量加入瓊脂，煮沸后裝入大一些的錐形瓶，瓶口用棉塞塞緊，放入高壓滅菌鍋里高壓滅菌，放涼到40℃左右時，倒入培養(yǎng)皿，蓋好皿蓋，放涼后培養(yǎng)基凝固成固態(tài)，就可以用來培養(yǎng)細菌了。
把要培養(yǎng)的細菌或用接種針（接種環(huán)）接入菌種，或用移液管把液體培養(yǎng)的細菌液滴入培養(yǎng)皿，用三角玻璃刮刀涂布開，蓋好皿蓋，就可以放入恒溫培養(yǎng)箱進行培養(yǎng)。24～48小時后觀察細菌生長情況、菌落特征等。
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