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96孔培養(yǎng)板在細(xì)胞操作中也嚴(yán)格遵循無菌原則，操作過程中要做到規(guī)范、科學(xué)，不會(huì)影響細(xì)胞生長(zhǎng)。其中最常見的問題是如何保證細(xì)胞在加樣后均勻化，并盡量減少換液對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)的影響。請(qǐng)問如何將細(xì)胞混合在一起？是滴管吹打還是振蕩培養(yǎng)皿？如果是后一種情況，那么細(xì)胞就會(huì)因?yàn)殡x心力的作用而被甩到周圍，導(dǎo)致細(xì)胞越少，細(xì)胞就越多！
這里提供了一個(gè)很好的方法：將培養(yǎng)板放入培養(yǎng)箱中，在培養(yǎng)皿中浸泡幾個(gè)小時(shí)，然后將培養(yǎng)皿放入培養(yǎng)皿中，使培養(yǎng)皿內(nèi)的細(xì)胞生長(zhǎng)均勻。記住，不要使用振蕩器振蕩，否則細(xì)胞會(huì)像你所說的那樣聚集起來。
培養(yǎng)板的孔徑越小，這種現(xiàn)象就越明顯，24孔和96孔板是不可避免的，因?yàn)橐后w的附壁使孔內(nèi)培養(yǎng)液不是在液面上，而是像凹鏡一樣高，而使用這兩種孔板，由于需要干預(yù)等原因，不能加足夠的培養(yǎng)液，導(dǎo)致細(xì)胞和培養(yǎng)液一起出現(xiàn)“邊集”現(xiàn)象，如果要在孔中央也有均勻的細(xì)胞，就必須增加接種細(xì)胞的數(shù)量。
在消化細(xì)胞的時(shí)候要注意吹打均勻，避免細(xì)胞成團(tuán)，同時(shí)要保證孔內(nèi)培養(yǎng)液的量，一般情況下，接種時(shí)要加足夠的培養(yǎng)液，干預(yù)液和培養(yǎng)液的量等于接種時(shí)培養(yǎng)液的量，這樣就能改變“邊集”現(xiàn)象，值得一試。
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