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大鼠原代細胞培養(yǎng)應(yīng)選用體重200g的SD大鼠，用胰酶代替膠原酶進行肝臟灌注，分離得到的肝細胞存活率大于90%，且純度很高。其中，胰酶的濃度很重要，濃度過低肝細胞消化不*，導(dǎo)致雜細胞和結(jié)締組織很多；過高則對肝細胞產(chǎn)生毒性作用，影響存活率。經(jīng)反復(fù)試驗得出胰酶的濃度為0.18%，且灌流時維持溫度37℃。另外，接種密度也是影響肝細胞存活率的一個重要因素，該試驗采用細胞密度為6×105個/mL。
細胞生長狀態(tài)好，既能保證細胞活率，又能滿足下一步試驗要求。肝細胞接種4h后，需用滴管輕吹換液，去除雜細胞及未貼壁的細胞，從而保證肝細胞的純度及高存活率。在WME培養(yǎng)液中添加胰島素、地塞米松及胎牛血清，配成*培養(yǎng)液，有利于細胞的增殖分化，使細胞貼壁后拉伸變薄，形態(tài)完整，呈島狀連接；試驗發(fā)現(xiàn)使用自制的鼠尾膠原處理細胞板，肝細胞的貼壁效果更好。
大鼠原代細胞從機體的組織(如人組織、小鼠組織、大鼠組織和兔組織等)經(jīng)蛋白酶或其它的方法獲得單個細胞并在體外進行模擬機體培養(yǎng)的細胞，稱為原代細胞。這類細胞生命周期有限，在有限的生命周期內(nèi)需掌握好細胞的生長空間，以保持細胞群中基因型和表型的一致性。原代細胞生長緩慢，一般認為，原代細胞培養(yǎng)的1代和到第十代以內(nèi)統(tǒng)稱為原代培養(yǎng)。原代培養(yǎng)的細胞一般傳至10代左右就不容易傳下去了，細胞的生長會出現(xiàn)停滯，大部分細胞衰老死亡。
大鼠原代細胞的分離和培養(yǎng)的成本可能相對更高，但原代細胞作為更接近體內(nèi)環(huán)境的研究模型，可讓你的研究結(jié)論更加接近“事實”，且原代細胞的使用可減少動物實驗所需的成本開支。另外在某些人體體內(nèi)無法進行的實驗，原代細胞因其高度保持了在體內(nèi)的生物學(xué)特性，可在一定程度解決這個問題。
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