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大鼠原代細(xì)胞培養(yǎng)應(yīng)選用體重200g的SD大鼠，用胰酶代替膠原酶進(jìn)行肝臟灌注，分離得到的肝細(xì)胞存活率大于90%，且純度很高。其中，胰酶的濃度很重要，濃度過(guò)低肝細(xì)胞消化不*，導(dǎo)致雜細(xì)胞和結(jié)締組織很多；過(guò)高則對(duì)肝細(xì)胞產(chǎn)生毒性作用，影響存活率。經(jīng)反復(fù)試驗(yàn)得出胰酶的濃度為0.18%，且灌流時(shí)維持溫度37℃。另外，接種密度也是影響肝細(xì)胞存活率的一個(gè)重要因素，該試驗(yàn)采用細(xì)胞密度為6×105個(gè)/mL。
細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)好，既能保證細(xì)胞活率，又能滿足下一步試驗(yàn)要求。肝細(xì)胞接種4h后，需用滴管輕吹換液，去除雜細(xì)胞及未貼壁的細(xì)胞，從而保證肝細(xì)胞的純度及高存活率。在WME培養(yǎng)液中添加胰島素、地塞米松及胎牛血清，配成*培養(yǎng)液，有利于細(xì)胞的增殖分化，使細(xì)胞貼壁后拉伸變薄，形態(tài)完整，呈島狀連接；試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)使用自制的鼠尾膠原處理細(xì)胞板，肝細(xì)胞的貼壁效果更好。
大鼠原代細(xì)胞從機(jī)體的組織(如人組織、小鼠組織、大鼠組織和兔組織等)經(jīng)蛋白酶或其它的方法獲得單個(gè)細(xì)胞并在體外進(jìn)行模擬機(jī)體培養(yǎng)的細(xì)胞，稱為原代細(xì)胞。這類細(xì)胞生命周期有限，在有限的生命周期內(nèi)需掌握好細(xì)胞的生長(zhǎng)空間，以保持細(xì)胞群中基因型和表型的一致性。原代細(xì)胞生長(zhǎng)緩慢，一般認(rèn)為，原代細(xì)胞培養(yǎng)的1代和到第十代以內(nèi)統(tǒng)稱為原代培養(yǎng)。原代培養(yǎng)的細(xì)胞一般傳至10代左右就不容易傳下去了，細(xì)胞的生長(zhǎng)會(huì)出現(xiàn)停滯，大部分細(xì)胞衰老死亡。
大鼠原代細(xì)胞的分離和培養(yǎng)的成本可能相對(duì)更高，但原代細(xì)胞作為更接近體內(nèi)環(huán)境的研究模型，可讓你的研究結(jié)論更加接近“事實(shí)”，且原代細(xì)胞的使用可減少動(dòng)物實(shí)驗(yàn)所需的成本開(kāi)支。另外在某些人體體內(nèi)無(wú)法進(jìn)行的實(shí)驗(yàn)，原代細(xì)胞因其高度保持了在體內(nèi)的生物學(xué)特性，可在一定程度解決這個(gè)問(wèn)題。
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