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以FaTEx-gen快速凈化萃取套組搭配液相層析串聯(lián)質(zhì)譜分析谷類樣體中之多重霉菌毒素

來源:綠巨研科貿(mào)易(上海)有限公司   2022年08月24日 13:40  

以FaTEx-gen快速凈化萃取套組搭配液相層析串聯(lián)質(zhì)譜分析谷類樣體中之多重霉菌毒素

應(yīng)用批注

霉菌毒素

緒論

霉菌毒素為霉菌增殖時(shí)產(chǎn)生的次級代謝產(chǎn)物,常見于生活中,且霉菌的孢子能透過空氣、風(fēng)力、水流和動物等方式來傳播。只要有少量蛋白質(zhì)、淀粉、脂質(zhì)及水份,就是適合真菌生長的環(huán)境,因此麥類、果實(shí)類、玉米及花生都是真菌主要的生長處。黃曲毒素具有潛在性的肝毒害(hepatoxin)及致癌性,其化學(xué)特性使其能于運(yùn)輸儲存期間穩(wěn)定存在,因此霉菌毒素易出現(xiàn)在食物鏈中;且除了直接食用受感染的食物,也可能透過喂食受污染飼料給動物而間接暴露于相關(guān)風(fēng)險(xiǎn)。

  霉菌毒素污染食品和飼料對于全球性作物及動物養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)影響甚巨,據(jù)估計(jì)每年約25%農(nóng)作物受到不同程度的霉菌毒素影響,單以美國和加拿大而言,真菌毒素即造成飼料業(yè)和家畜業(yè)每年損失約50億美金(IFST, 2006)。

  本篇應(yīng)用以FaTEx-gen快速凈化萃取套組進(jìn)行前處理,搭配LC-MS/MS檢測黃曲毒素的含量,建立一套快速的檢測方法,利于維護(hù)飼料質(zhì)量及相關(guān)作物食品安全。

摘要

本研究以FaTEx快速凈化萃取套組,分析谷類樣品中之十一項(xiàng)霉菌毒素,包含黃曲毒素類、赭曲毒素A及鐮孢菌毒素類(伏馬毒素、脫氧雪腐鐮刀菌烯醇(嘔吐毒素)、玉米赤霉毒素等),項(xiàng)目列表詳見表1。

  針對霉菌毒素的檢測,通常會依其種類選用相對應(yīng)的特化免疫親和管進(jìn)行分析。此類免疫親和管柱的分析效能具有專一性,因此能分析的項(xiàng)目較限縮,通常為專項(xiàng),或者有較多項(xiàng)的例如黃曲毒素專用管則可同時(shí)分析黃曲毒素 B1、B2、G1、G2四項(xiàng)。然而在欲達(dá)成各種類多重毒素分析的目的時(shí),于檢測時(shí)程上便會較耗時(shí),且使用相對應(yīng)特化管柱的成本也高許多。

  本篇使用FaTEx凈化套組,搭配ZORBAX Eclipse Plus C18通用管柱及Agilent 6470液相層析串聯(lián)式質(zhì)譜儀,檢測黃豆及花生樣品,樣品之標(biāo)準(zhǔn)品添加濃度如表二;樣品制備流程如下,樣品秤樣后加標(biāo)靜置,加入12mL 70:30 (v:v)乙腈/水溶液(含0.5%甲酸)以高速震蕩機(jī)震蕩30分鐘,于3500rpm離心5分鐘,取上清液5mL經(jīng)過FaTEx套組凈化,取檢液1.2mL以氮?dú)獯抵廖⒏?,再?mL 50:50 (v:v)乙腈/水溶液回溶。分析結(jié)果如表三所示,回收率落在81.9~112.7%范圍內(nèi),CV%皆小于20,顯示此為一快速、穩(wěn)定之檢驗(yàn)方法。

前處理步驟

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液相層析參考條件

移動相流速:0.4 mL/min

進(jìn)樣體積:5µL

層析管柱:ZORBAX Eclipse Plus C18   Rapid Resolution HD   1.8μm,內(nèi)徑3.0 × 100 mm

流動相溶液

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表1、霉菌毒素11項(xiàng)藥劑之多重反應(yīng)偵測模式參數(shù)

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結(jié)論

本篇以FaTEx-gen萃取凈化套組搭配ZORBAX Eclipse Plus C18管柱于液相串聯(lián)質(zhì)譜之分析方法,檢測谷類樣品(黃豆及花生)之多重霉菌毒素(黃曲毒素類、赭曲毒素A及鐮孢菌毒素類)共11項(xiàng),每次分析時(shí)間13分鐘,為快速之檢驗(yàn)方法。

FaTEx-gen萃取凈化套組可針對復(fù)雜檢體基質(zhì)加強(qiáng)凈化,降低基質(zhì)干擾。

以FaTEx-gen套組檢測添加多重毒素標(biāo)準(zhǔn)品之谷類樣品(添加濃度:黃曲毒素B1 Aflatoxin B1,黃曲毒素B2  Aflatoxin B2,  黃曲毒素G1  Aflatoxin G1,  黃曲毒素G2 Aflatoxin G2,赭曲霉毒素 A  Ochratoxin A:2.5 ng/g,T-2 toxin, HT-2 toxin:5 ng/g;嘔吐毒素Deoxynivalenol, 玉米赤霉烯酮 Zearalenone:25 ng/g;伏馬毒素 B1  Fumonisin B1,伏馬毒素 B2  Fumonisin B2:100 ng/g)回收率落在81.9~112.7%范圍內(nèi),變異系數(shù)皆小于20,為穩(wěn)定之檢驗(yàn)方法。

 

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