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Transnetyx組織常見問題

來源:北京華新康信生物科技有限公司   2022年08月25日 09:34  

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/Transnetyx 組織常見問題解答 | Transnetyx 組織

文化傳媒

1.培養(yǎng)基 (Neurobasal ® /B27 ® /GlutaMAX™) 能穩(wěn)定多久?

Transnetyx的培養(yǎng)基可在 4 o C 避光保存長達 6 個月。為防止氧化,可以將培養(yǎng)基分裝成更小的體積并儲存在 4 o C。

2. 我需要多久進行一次媒體交換?

Transnetyx 3 4 天更換 1/2 培養(yǎng)基,但這部分取決于細胞密度。參見 INVITROGEN (LTI) FOCUS 16:6。如果細胞密度高于 500/mm 2,則每 2 天更換 1/2

3. NbActiv1™ NbActiv4® 有什么區(qū)別?

NbActiv4® 含有與 NbActiv1™ 相同的成分以及膽固醇、雌激素和肌酸。NbActiv4® 主要用作電生理學介質(zhì)。  

4. 鋪板海馬培養(yǎng)物時,通常向 NbActiv1™ (Neurobasal ® /B27 ® /GlutaMAX™) NbActiv4® (Neurobasal ® /B27 ® /GlutaMAX ) 添加 25uM 谷氨酸

/膽固醇/雌激素/肌酸)直至培養(yǎng)第 4 天。谷氨酸的目的是什么?

它幫助海馬神經(jīng)元發(fā)芽并促進活力。在 DIV4 后,應(yīng)使用不含谷氨酸的培養(yǎng)基進行半次培養(yǎng)基交換。

5.漏掉谷氨酸有問題嗎?

DIV4 中,您的存活率將降低約 30%。

6. 如果我在 NbActiv1™ 中培養(yǎng)細胞,我可以將培養(yǎng)基更換為 NbActiv4® 嗎?

是的,在培養(yǎng)過程中的任何時候,培養(yǎng)基都可以從 NbAcitv1™ 更改為 NbActiv4®。然而,事實并非如此。接種在 NbActiv4® 中的細胞不應(yīng)更換為 NbActiv1™。

7.我需要哪些額外的用品來維持培養(yǎng)物?

每個訂單包含足夠的培養(yǎng)基以開始培養(yǎng)并維持 4 5 天。除此之外,您還需要更多培養(yǎng)基,Transnetyx可以通過 Invitrogen 單獨購買完整的即用型配方。您還需要選擇鍍膜玻璃或塑料基材,Transnetyx推薦使用聚-D-賴氨酸作為基材。除此之外,您還需要解離溶液,Transnetyx推薦Transnetyx Papain and Hibernate® E-Ca 和火拋光移液器。Transnetyx將所有這些用品都包含在Transnetyx的完整培養(yǎng)套件中。

8.我應(yīng)該在電鍍培養(yǎng)基中添加抗生素/抗真菌劑嗎?例如:pen/strep/fungizone 還是慶大霉素?

Transnetyx通常在不使用抗菌抗生素和抗真菌劑的情況下進行培養(yǎng),并取得了很好的成功。這具有三個優(yōu)點:

首先,當出現(xiàn)污染時,更容易識別污染源。其次,如果你使用抗生素,當你被感染時,就更難擺脫了。第三,抗生素已被證明可以激活神經(jīng)元中的癲癇樣爆發(fā)活動。使用抗生素是一種常見的做法,類型和濃度取決于最終用戶。

Hibernate® 媒體

Hibernate ®Neurobasal ® B27 ® 僅用于研究目的,由 Invitrogen Corporation 制造。Hibernate ®、Neurobasal ® B27 ® Invitrogen Corporation 的商標。

1. Hibernate® Media 能穩(wěn)定多久?

Transnetyx Hibernate 可在 4 o C 的黑暗中保存長達 1 年。為防止氧化,可以將培養(yǎng)基分裝成更小的體積并儲存在 4 o C。

2.您是否總是在 Hibernate® 中添加 B27® GlutaMAX™,還是僅在 Hibernate® 中保持細胞存活?

幾乎總是。請參見 Brewer Price (1996) PM:8856709 的圖 1 37 o C 環(huán)境 CO 2中,Neurobasal®/B27®/GlutaMAX™ 中的 LD50 24 小時,而在 Hibernate®/B27®/GlutaMAX® 中為大于 3 天。

3.Transnetyx可以提供定制的 Hibernate 配方嗎?

是的,Transnetyx可以提供定制的 Hibernate 配方。

4. Hibernate 的其他用途包括:

轉(zhuǎn)基因小鼠基因分型過程中的大腦儲存。

將腦組織運送給合作者。

基質(zhì)

1.我的神經(jīng)元更多地以細胞簇或細胞團的形式生長,而不是孤立的。怎么了?

這意味著細胞與自身的粘附比與基底的粘附更緊密。最可能的問題是準備不足的底物。將您的方案與推薦的聚-D-賴氨酸制備和底物涂層進行比較。另一種可能性是電鍍密度可能太高。

2.關(guān)于聚-L-賴氨酸與聚-D-賴氨酸,我假設(shè)使用聚-D-賴氨酸,因為如果它分解成賴氨酸,則d賴氨酸不能被細胞使用。這有什么道理嗎?

這就是理論。在一些早期研究中(Brain Res. 494:65(1989)),Transnetyx發(fā)現(xiàn)差別不大。

3 . 一些研究人員使用聚乙烯亞胺 (PEI) 代替聚-D-賴氨酸 (PDL)。一個比另一個有優(yōu)勢嗎?

PEI PDL 便宜。Transnetyx PEI 上沒有取得太大成功,但 Mark Mattson 在開始在 Neurobasal®/10% 血清中培養(yǎng)后一直使用它。報告表明神經(jīng)元存活率或峰值率沒有顯著差異。

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其他的這些是菌株

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