北京華新康信現(xiàn)貨 大力回饋新老客戶，現(xiàn)貨打折出售，現(xiàn)有品牌和種類，新老客戶可以自由選購：

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北京華新康信也有transnetyx實(shí)驗(yàn)試劑銷售，對transnetyx組織常見問題做了解答如下：

家/Transnetyx 組織常見問題解答 | Transnetyx 組織

Soussou WV, Yoon GJ, Brinton RD, Berger TW (2007) 在表面處理的多電極陣列上培養(yǎng)的海馬神經(jīng)元的神經(jīng)元網(wǎng)絡(luò)形態(tài)和電生理學(xué)。IEEE 跨生物醫(yī)學(xué)工程。54:1309-1320。 下午：17605362

Brewer GJ, Cotman CW (1989) 海馬神經(jīng)元在低密度限定培養(yǎng)基中的存活和生長：夾心培養(yǎng)技術(shù)或低氧的優(yōu)勢。大腦研究 494：65-74。下午：2765923。

預(yù)涂層 PDL 培養(yǎng)皿

1.你能推薦任何品牌的預(yù)涂層組織培養(yǎng)瓶或制備組織培養(yǎng)瓶用于原代神經(jīng)元生長的方法嗎？

Transnetyx已經(jīng)確定，細(xì)胞培養(yǎng)塑料或玻璃上的聚-D-賴氨酸涂層在涂層后明顯開始失去效力。鍍膜玻璃條在 14 天后失效，鍍膜塑料在 10 天后失效。 Transnetyx懷疑一些預(yù)涂板的效果令人滿意，但Transnetyx的經(jīng)驗(yàn)是，其中一些會導(dǎo)致原代神經(jīng)元的粘附和存活不良。因此，Transnetyx建議您在一周內(nèi)或上述幾天后涂抹您自己的基材并使用它們。

2.你們銷售預(yù)涂層培養(yǎng)皿嗎？

是的，Transnetyx銷售 PDL 涂層燒瓶、孔板和玻片。Transnetyx在一夜之間涂上這些涂層，并在第二天將它們運(yùn)送到隔夜交貨。Transnetyx建議您在一周內(nèi)使用這些。  

新鮮紙巾

1.你們提供什么年齡的紙巾？  

Transnetyx的標(biāo)準(zhǔn)組織是胚胎第 18 天或懷孕媽媽（3-4 個月大）的成人組織。所有其他組織年齡可用于特殊訂單，交貨時間為 2-3 周。

Wolburg H, Neuhaus J, Kniesel U, Krauss B, Schmid EM, Ocalan M, Farrell C, Risau W (1994) 調(diào)節(jié)血腦屏障內(nèi)皮細(xì)胞的緊密連接結(jié)構(gòu)。組織培養(yǎng)、第二信使和共培養(yǎng)的星形膠質(zhì)細(xì)胞的影響。J 細(xì)胞科學(xué) 107（第 5 部分）：1347-1357。 下午：1692329  

Risau W, Engelhardt B, Wekerle H (1990) 血腦屏障的免疫功能：不完整的表現(xiàn)

體外大鼠腦微血管內(nèi)皮的蛋白質(zhì)（自身）抗原。細(xì)胞生物學(xué)雜志 110:1757-1766。 PM:7929640 有關(guān)從脊髓分離運(yùn)動神經(jīng)元的更多信息 M. Das、JW Rumsey、N. Bhargava、M. Stancescu 和 JJ Hickman。確定的長期體外神經(jīng)肌肉接頭組織工程模型。生物材料 31 (18):4880-4888, 2010.  PM:20346499

2.你保證每瓶皮層和海馬有多少神經(jīng)元？

保證的神經(jīng)元數(shù)量為海馬體 100 萬個或皮層神經(jīng)元 200 萬個。其他組織類型的數(shù)字不同。

3 . 根據(jù) NIH 批準(zhǔn)的協(xié)議獲得動物大腦和脊髓組織有什么保證？

Transnetyx的動物協(xié)議 #233-08-013 已于 2020 年 4 月 7 日獲得南伊利諾伊大學(xué)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動物護(hù)理和使用委員會的批準(zhǔn)。  

對于 NIH 撥款，脊椎動物部分：

保證編號為 A-3209-01。

F. 脊椎動物

用于原代培養(yǎng)的海馬、皮質(zhì)和其他腦和脊髓神經(jīng)元將從胚胎或出生后早期大鼠或小鼠的腦中獲得。用氟烷麻醉后將解剖大腦。將用于大鼠的心臟。小鼠將在麻醉下被送上斷頭臺或斷頸。這些方法與美國獸醫(yī)協(xié)會專家組的建議一致。

通過從動物身上分離神經(jīng)元，可以研究比整個動物研究更多的實(shí)驗(yàn)變量，從而減少對動物的需求。大鼠和小鼠的大腦是所有動物大腦中研究得好的。

平均住房需求估計為 2 天，足以讓嚙齒動物從運(yùn)輸創(chuàng)傷中恢復(fù)。動物將由獲得 AALAC 認(rèn)證的 SIUSM 實(shí)驗(yàn)室動物醫(yī)學(xué)中心負(fù)責(zé)照料，并在獲得 DACLAM 認(rèn)證的 Helen Valentine、DVM、MS 的指導(dǎo)下?lián)碛?span> 10 名員工

用氟烷麻醉后將解剖大腦。將用于大鼠的心臟。小鼠將在麻醉下被送上斷頭臺或斷頸。這些方法與美國獸醫(yī)協(xié)會專家組的建議一致。因此，這些程序?qū)游锏氖褂孟拗圃谶M(jìn)行具有科學(xué)價值的研究中不可避免的范圍內(nèi)，并將動物的不適、痛苦和疼痛降至低。

冷凍細(xì)胞

1.你們提供冷凍細(xì)胞系嗎？

目前，Transnetyx不提供冷凍細(xì)胞，也沒有冷凍細(xì)胞的方案。您可以請求快速凍結(jié)作為自定義選項(xiàng)，但需要支付額外的處理費(fèi)。

解離

2.海馬或皮層細(xì)胞的活力是否取決于解離的方法？你更喜歡機(jī)械解離還是酶解？

是的，使用木瓜蛋白酶可獲得更高的可行產(chǎn)量（參見 J Neurosci Meth 71:143），但表面蛋白的消化是不可避免的。對于短期（少于 4 天），這是一個問題。從長遠(yuǎn)來看，它可能并不重要。使用火拋光的 9 英寸玻璃移液管可獲得更高的存活率，使用藍(lán)色塑料移液管可獲得更低的能見度。對于 E18 組織，Transnetyx使用機(jī)械來提高速度和簡單性。

3.您是否使用酶來制備皮質(zhì)培養(yǎng)物？

為了獲得更高的產(chǎn)量，Transnetyx使用了 2mg/mL 的 木瓜蛋白酶溶液， 稀釋在沒有 B27® 的 Hibernate® E-Ca 中。該溶液應(yīng)在 30 o C 水浴中孵育 10 分鐘。不應(yīng)向該溶液中添加其他化學(xué)物質(zhì)，例如 EDTA、巰基乙醇或半胱氨酸-HCl。請參閱Transnetyx的 原代神經(jīng)元細(xì)胞培養(yǎng)方案 了解更多信息。

4.為什么推薦 Hibernate® E-Ca without B27® 以實(shí)現(xiàn)與木瓜蛋白酶的最佳解離？

鈣促進(jìn)粘附。因此，去除鈣會促進(jìn)神經(jīng)元的解離。為了提供細(xì)胞粘附蛋白作為木瓜蛋白酶的主要底物，B27® 被省略，因此 B27® 中的蛋白質(zhì)不會競爭底物。

文化

1. 原代細(xì)胞會增殖嗎？如果有，你能傳代多少次？

原代細(xì)胞不會增殖，不應(yīng)傳代。如果傳代，只有 30% 的細(xì)胞存活，細(xì)胞不能進(jìn)行第二次傳代。

2.你知道每瓶組織提供多少星形膠質(zhì)細(xì)胞嗎？

星形膠質(zhì)細(xì)胞的數(shù)量是細(xì)胞數(shù)量的 20%。培養(yǎng)神經(jīng)元培養(yǎng)物時，使用不含血清 (NbActiv1™) 的培養(yǎng)基培養(yǎng)星形膠質(zhì)細(xì)胞含量低于 2% 的培養(yǎng)物。這在沒有 AraC 的情況下抑制了膠質(zhì)細(xì)胞的生長。在培養(yǎng)星形膠質(zhì)細(xì)胞時，可使用含有血清（NbAstro™ - Neurobasal®/Horse Serum/GlutaMAX™）的培養(yǎng)基在 1.5 至 2 周內(nèi)使星形膠質(zhì)細(xì)胞匯合。

3.我應(yīng)該何時添加 AraC 作為星形膠質(zhì)細(xì)胞的有絲分裂抑制劑？

在Transnetyx推薦的 Neurobasal®/B27®/GlutaMAX™ 培養(yǎng)基中，您根本不需要添加 AraC。培養(yǎng)基不會像血清那樣人為地刺激星形膠質(zhì)細(xì)胞的增殖。

4.星形膠質(zhì)細(xì)胞會增殖嗎？如果有，它們可以傳代多少次？  

星形膠質(zhì)細(xì)胞確實(shí)增殖并且可以傳代。Transnetyx的 E18 星形膠質(zhì)細(xì)胞最多可成功傳代 4-5 次。

5.海馬神經(jīng)元何時表現(xiàn)出興奮性毒性？

乙酰膽堿在Transnetyx所知道的任何年齡都沒有毒性。

從 E18 海馬培養(yǎng) 7 天開始，谷氨酸的毒性最大。皮層神經(jīng)元可能提前 1 或 2 天。

6.我的培養(yǎng)物被污染了。一開始它們看起來很好，但現(xiàn)在介質(zhì)是混濁和黃色的，有許多 1-3 um 長的暗相。

至少有 5 種可能的污染源（假設(shè)您的培養(yǎng)箱中的其他培養(yǎng)物沒有受到污染并且培養(yǎng)箱底部的加濕水是清澈的）：

培養(yǎng)容器本身可能是污染源。為了排除這種情況，將新鮮過濾的培養(yǎng)基添加到另一個培養(yǎng)容器中。如果介質(zhì)變黃或混濁，則容器已被污染。

粘合基材。這很常見。您可以將新鮮過濾的培養(yǎng)基放在準(zhǔn)備好的基材上，以尋找這種污染源。

培養(yǎng)基本身或其添加劑之一（例如谷氨酸）。這很常見。請務(wù)必在您的培養(yǎng)基的未涂層孔和Transnetyx提供的孔中進(jìn)行單獨(dú)的測試。

看似隨機(jī)或低水平的污染可能來自于向開放文化的方向說話甚至呼吸。此外，無菌罩和培養(yǎng)箱之間的空氣不是無菌的，并且大多數(shù)培養(yǎng)容器沒有密封。如果從通風(fēng)罩到培養(yǎng)箱的距離很遠(yuǎn)，您可以將培養(yǎng)物放入已用 70% 乙醇沖洗過的塑料食品容器中。

組織。雖然Transnetyx對Transnetyx提供的培養(yǎng)基進(jìn)行無菌測試，但組織本身無法測試。如果您能提供證據(jù)證明您的紙巾按時送達(dá)并在 4 o  C 下保存直到使用，并且排除了上述 4 種可能性，請致電Transnetyx進(jìn)行一次性更換。通常，Transnetyx的經(jīng)驗(yàn)是，您的樣品是Transnetyx本周所有發(fā)貨中被污染的樣品，因此請理解Transnetyx需要進(jìn)行上述測試。

7.我想知道你能否給我建議，我需要多少個細(xì)胞，才能獲得足夠的蛋白質(zhì)來進(jìn)行幾次蛋白質(zhì)印跡？即，多少個細(xì)胞等于 20-50 ug 蛋白質(zhì)？

根據(jù) Patel 和 Brewer (2003) 的說法，每 18,000 個培養(yǎng)一周的細(xì)胞含有大約 6 ug 的蛋白質(zhì)。因此，3000 個細(xì)胞/ug 蛋白質(zhì)。需要大約 50 g 蛋白質(zhì)的蛋白質(zhì)印跡提取物需要大約 150,000 個細(xì)胞。

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其他的這些是菌株

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