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THP-1細胞培養(yǎng)經(jīng)驗與要點

來源:蘇州海星生物科技有限公司   2022年09月01日 13:29  

該細胞從一名1歲的患有急性單核細胞性白血病的男孩的外周血中分離建立。該細胞可以吞噬乳膠顆粒和激活的紅細胞,細胞膜和胞漿內(nèi)均沒有免疫球蛋白,表達C3R和FcR;可受佛波酯TPA誘導(dǎo)向單核系方向分化;可作為轉(zhuǎn)染宿主。

細胞名稱:人單核細胞白血病細胞
細胞簡稱:THP-1
細胞別名:THP1; THP 1; THPI; THP-1(ATCC); O-THP-1; Tohoku Hospital Pediatrics-1
產(chǎn)品貨號:TCH-C361
細胞形態(tài):單核細胞樣
生長特性:懸浮生長
培養(yǎng)體系:RPMI-1640+10%FBS+0.05 mM β-mercaptoethanol+1%P/S


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THP-1細胞培養(yǎng)注意要點

THP-1細胞為懸浮生長,部分細胞聚集成團,部分細胞分散
THP-1細胞更喜歡酸性環(huán)境,在偏酸性環(huán)境中,THP-1生長更快,所以當(dāng)培養(yǎng)基稍微變黃(呈橘紅色)時,是適合細胞生長的,此時補液或半換液即可。
THP-1細胞有密度依賴性,THP-1細胞密度低時,生長較慢,培養(yǎng)密度維持在4 ~8×105 /mL為宜;超過2.0 ×106 /mL則需要傳代。
THP-1細胞對機械力較敏感。正常培養(yǎng)時,應(yīng)盡量避免吹打力道過大。暴力吹打會使細胞分化和死細胞增加。
血清質(zhì)量差異可能引起細胞狀態(tài)變化,建議選用高質(zhì)量的胎牛血清。



THP-1細胞換液


補液法:培養(yǎng)基變黃時可補加適量(1~2mL)新鮮培養(yǎng)基,補加1-2次之后,用離心的方式全部換液,離心1200rpm (約250g)3分鐘。

半換液法:以T25瓶子為例,瓶子里裝有5mL培養(yǎng)基。豎起瓶子靜置一段時間,待細胞沉底,小心吸出2.5mL的培養(yǎng)基,轉(zhuǎn)移到離心管,離心1200rpm (約250g)3分鐘,檢查有沒有沉淀,以免損失細胞;原瓶補充2.5mL新鮮培養(yǎng)基,離心管里若有細胞,則用新鮮培養(yǎng)基重懸后放回原瓶。
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[半換液操作示意圖]

如果換液后第二天培養(yǎng)基就變得很黃,同時鏡下檢查未污染,說明細胞密度大,應(yīng)該傳代。


THP-1細胞傳代


搖晃培養(yǎng)瓶,把細胞搖勻,均分到兩個瓶子里,每瓶再補充等量培養(yǎng)基。

離心法:離心后計數(shù),按照40-50萬細胞/mL的密度接種到T25瓶里,瓶中培養(yǎng)基量以5mL為宜。不方便計數(shù)時,按1:2比例傳代。
死細胞或細胞碎片較多的情況下,建議用離心法傳代,離心轉(zhuǎn)速可適當(dāng)降低(推薦800~1000rpm或160~200g)。


THP-1細胞凍存

由于THP-1是懸浮細胞,更易受到凍存影響,建議加大凍存密度,大約200萬-300萬/mL為宜,以提高復(fù)蘇存活率。
THP-1細胞對凍存溫度比較敏感,建議凍存后立即轉(zhuǎn)入-80℃冰箱,長期保存應(yīng)放在液氮罐中。
經(jīng)測試,THP-1使用非程序降溫凍存液的復(fù)蘇存活率高于程序降溫凍存液,推薦使用HyCyte™一步凍存液(GUCP-R201)。


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THP-1細胞復(fù)蘇



THP-1細胞復(fù)蘇后通常需要3-5天恢復(fù)狀態(tài),建議復(fù)蘇后48小時內(nèi)不要進行操作。


THP-1培養(yǎng)常見問題及解決方法



培養(yǎng)基里一定要加β-巰基乙醇( β-mercaptoethanol)嗎?

β-巰基乙醇是一種常用的培養(yǎng)補充劑,有抗氧化的作用,可減少氧化應(yīng)激對THP-1細胞的影響。當(dāng)細胞密度過大但需要維持時,可適當(dāng)增加巰基乙醇的比例(不超過標(biāo)準(zhǔn)量的1.5倍)。

懸浮細胞在鏡下觀察時,難以聚焦或估算密度怎么辦?

懸浮細胞會隨著液體流動,不容易聚焦,靜置5-10分鐘使細胞沉底,之后再輕輕放上顯微鏡觀察,將有助于聚焦和估算細胞密度。

THP-1細胞在培養(yǎng)過程中細胞發(fā)生聚團怎么辦?

少量細胞聚團,呈葡萄串狀,屬于正常現(xiàn)象,特別是細胞密度較低時,易出現(xiàn)這種情況。更換血清品牌或增大血清比例(不超過20%)有助于解決聚團問題。不建議將聚團的細胞吹散,等待密度高時,會自己分散開。

THP-1細胞在培養(yǎng)過程中細胞發(fā)生貼壁怎么辦?

少量細胞貼壁屬于正常情況,將細胞懸液轉(zhuǎn)移至新瓶中即可。當(dāng)貼壁細胞的比例高于20%,說明細胞生長環(huán)境有異常,需排查培養(yǎng)箱設(shè)置、培養(yǎng)基成分,以及培養(yǎng)器皿是否異常。

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[THP-1細胞在密度較高時不聚團]


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