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通過基因重組制備的抗體片段（Fab）等低分子抗體，與完整抗體相比，其分子尺寸更小，具有易擴散、滲透性強，以及不會與Fc受體產生相互作用、副作用小等優(yōu)點。并且，可以利用大腸桿菌、CHO細胞等獲得高濃度、高表達的抗體片段，因此在抗體藥物、診斷用藥的應用上備受關注。
一般來講，低分子抗體的純化工藝初步捕獲（Capture）步驟推薦使用Protein L親和層析（AFC），其后接離子交換層析（IEC）等進行精純。下面介紹幾個以Protein L為配基的親和填料分離純化低分子抗體的相關文獻。
● 抗體的基本結構及分離抗體時使用的親和層析配基
抗體結構 | 結合部位 | AFC配基 | 目標純化物 | ||
| H鏈 | VH (VH3) | Protein A | IgG, Fab, F(ab')2, scFv, VH domain | |
CH1 | Protein G | IgG, Fab, minibody | |||
抗體片段 | |||||
CH2 (-CH3; Fc) | Protein A | IgG, Fc fusion protein | |||
Protein G | |||||
CH3 | 抗體片段 | ||||
Fc; N-glycan | Fc受體 | ||||
L鏈 | VL | Protein L | Fab, F(ab')2, scFv, diabody, minibody, VL domain, dAb | ||
CL | (Kappa) (Lambda) | 抗體片段 | Fab, F(ab')2, scFv, diabody, minibody, dAb | ||
（純化工藝示例） | 培養(yǎng)上清（Fab) （大腸桿菌、CHO細胞等） | （候選填料例） TOYOPEARL AF-rProtein L-650F (TOYOPEARL AF-rProtein A HC-650F) （其他Protein G或抗體特異性AFC填料） TOYOPEARL Sulfate-650F TOYOPEARL GigaCap S-650M TOYOPEARL MX-Trp-650M (MXC) TOYOPEARL NH2-750F TOYOPEARL GigaCap Q-650M （其他疏水層析填料等） | |
預處理（離心等） | |||
Protein L親和層析 | |||
IEC （陽離子交換層析） | |||
IEC (FT; Flow-through)等 （陰離子交換層析） | |||
● 使用Protein L親和層析等填料從大腸桿菌、CHO細胞中純化低分子抗體的相關文獻
● 從大腸桿菌中分離純化重組Fab和相關雜質的示例（文獻No. 1）
（要點）
• 確立了大腸桿菌表達的重組低分子抗體(Fab)的純化方法，并對相關雜質進行了分離和識別（表征）。
• 通過使用Protein L親和層析、Protein G親和層析及陽離子交換層析的三步層析法（自動化），對4種重組Fab進行純化，再做質譜分析。
• 識別出純化產物中的Fab異構體、Fab相關雜質的L鏈（LC）以及L鏈的低分子片段（LMW）。
• 自動化Fab純化及分析法的確立，讓生產菌株及培養(yǎng)條件的優(yōu)化變得容易。
● 使用Protein L親和層析從大腸桿菌分離純化重組Fab及相關雜質的示例（出自文獻1）
使用TOYOPEARL AF-rProtein L-650F，有效分離出目標物質Fab，以及產品相關雜質的L鏈（LC）和LC低分子片段（LMW）。
Ref.: C. Schimek et al., Three-dimensional chromatography for purification and characterization of antibody fragments and related impurities from Escherichia coli crude extracts,
J. Chromatography A, available on line November 13, 2020, 461702
● Protein L親和填料和篩選用預裝柱產品一覽表
貨號 | 產品名稱 | 粒徑 （μm） | 包裝** (mL) | 備注 |
0023486 | TOYOPEARL AF-rProtein L-650F | 30 - 60 | 10 | 散裝填料（瓶） |
0045200 | SkillPak TOYOPEARL AF-rProtein L-650F | 30 - 60 | 1 mL×1支 | 預裝柱 |
0045221 | SkillPak TOYOPEARL AF-rProtein L-650F | 30 - 60 | 1 mL×5支 | 預裝柱 |
0045257 | SkillPak TOYOPEARL AF-rProtein L-650F | 30 - 60 | 5 mL×1支 | 預裝柱 |
0045228 | SkillPak Antibody (TOYOPEARL AF-rProtein A HC-650F, AF-rProtein L-650F, NH2-750F, Sulfate-650F, GigaCap Q-650M, GigaCap S-650S) | - | 1 mL×6種×1支 | 預裝柱 |
0045229 | SkillPak mAb Platform (TOYOPEARL AF-rProtein A HC-650F, NH2-750F, Sulfate-650F) | - | 1 mL×3種×2支 | 預裝柱 |
0045232 | SkillPak Best-in-Class (Ca++Pure-HA*, TOYOPEARL AF-rProtein A HC-650F, AF-rProtein L-650F, NH2-750F, Sulfate-650F) | - | 1 mL×5種×1支 | 預裝柱 |
* Ca++Pure-HA是美國制造的產品，受美國相關出口法令管轄。
**填料有不同粒徑和不同包裝規(guī)格的產品。
SkillPak分為1 mL預裝柱（7 mm I.D.×2.5 cm）和5 mL預裝柱（8 mm I.D.×10 cm）。
【1 mL預裝柱】
進口：使用“貨號0017955 拉緊螺栓型（帶包頭）”，不可使用“貨號0016566 便攜式接頭·1/16"（PEEK）”。
出口：可直接連接內螺紋接頭，連接外螺紋接頭時需使用管套（“貨號0017898 拉緊螺栓型管套”）等配件。
【5 mL預裝柱】
進口和出口：使用“貨號0016566 便攜式接頭·1/16"”或“貨號0017955 拉緊螺栓型（帶包頭）”。
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