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細(xì)菌內(nèi)毒素(脂多糖)的的純化

來源:科德角國際生物醫(yī)學(xué)科技(北京)有限公司   2022年09月13日 10:26  

脂多糖Lipopoly saccharideLPS是革蘭氏陰性細(xì)菌細(xì)胞壁中的一種成分,脂多糖對宿主是有毒性的。脂多糖只有當(dāng)細(xì)菌死亡溶解或用人工方法破壞菌細(xì)胞后才釋放出來,所以叫做內(nèi)毒素

 

三氯醋酸法(Trichloroacetic Acid,TCA)、酚水法苯酚╱氯仿╱石油醚法PCP)、DMSO、高壓超聲處理法所提取的LPS或多或少受到蛋白質(zhì)、核酸及多糖的污染,故需作一定的純化。LPS的純化方法目前最-常用的為超速離心(4萬轉(zhuǎn)×4小時,共三次),在這一條件下,LPS可沉淀下去,而蛋白質(zhì)、核酸及多糖則保留在上清液中,去除上清液即可得到較為純化的LPS。

 

 

但是這一方法需時較長,且質(zhì)量過關(guān)的超速離心機目前在國內(nèi)亦不十分普及,故而難以推廣應(yīng)用。我們在實際工作中體會到,用任何方法提取的LPS,可再以PCP純化一次(140ml/g LPS,然后只需一次超離,即可取得高度純化的LPS

 

提取的LPS除可被蛋白質(zhì)、核酸及多糖污染外,還可被一些小分子物質(zhì),如多胺、陽離子Ca++、Mg++K+的污染。通過電透析可將這類小分子物質(zhì)除去。此時形成的LPS為酸性LPS(由LPS中類脂A上的磷酸基團(tuán)形成的)。應(yīng)用堿中和LPS,可變成LPS的鹽。如用NaOH中和則可變成LPS鈉鹽而應(yīng)用三乙基乙胺則可變成LPS三乙胺鹽、后者極易溶解于水,已廣泛地應(yīng)用于生物學(xué)研究。

 

綜上所述,LPS取方法較多,應(yīng)當(dāng)根據(jù)菌種和實驗條件而選用合適方法。PCP法對R型菌尤顯長處,高壓超聲法雖可用于SR,但方法步驟繁雜;DMSO法與TCA法已很少用到;而酚水法無論產(chǎn)量,純度及物理性質(zhì)均較滿意的,不失為一個實用的方法。LPS純化目前一般采用PCP法及一次超速離心,應(yīng)用該法可使LPS污染物包括蛋白質(zhì)、核酸及多糖除去,而應(yīng)用片透析方法則可除去LPS中的小分子物質(zhì)如多胺、二價陽離子,從而可得LPS轉(zhuǎn)化成實驗需要的鹽類。

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