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piuma壓痕儀在基質(zhì)加固Ca影響的體外模型分離的大鼠心肌細(xì)胞肌脂肪

來源:杭州軒轅科技有限公司   2022年09月16日 10:09  

一、前言

細(xì)胞外基質(zhì)(ECM)僵硬是心臟病的關(guān)鍵因素。ECM強(qiáng)直增加會(huì)被動(dòng)地抑制心臟收縮,但基質(zhì)硬化是否以及如何主動(dòng)改變心肌細(xì)胞收縮力尚不清楚。旨在研究心肌細(xì)胞 - 基質(zhì)相互作用的體外模型缺乏將剛性基質(zhì)的被動(dòng)抑制與主動(dòng)基質(zhì)誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞性質(zhì)改變分開的可能性。在這里,我們介紹一種新穎的實(shí)驗(yàn)?zāi)P?,該模型允許探索心肌細(xì)胞對(duì)基質(zhì)加固的反應(yīng)性功能改變。在代表健康和患病心臟的可調(diào)節(jié)硬度基質(zhì)上培養(yǎng)成年大鼠心肌細(xì)胞24小時(shí),并在功能測(cè)量前從其基質(zhì)中分離出來。我們證明,基質(zhì)加固與被動(dòng)抑制無關(guān),可減少細(xì)胞縮短和鈣2+處理但不改變肌病產(chǎn)生的力。此外,成體培養(yǎng)的心肌細(xì)胞的分離允許細(xì)胞從一個(gè)基質(zhì)轉(zhuǎn)移到另一個(gè)基質(zhì)。這表明,當(dāng)基質(zhì)僵硬正?;瘯r(shí),僵硬誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞變化是逆轉(zhuǎn)的。這些基質(zhì)硬度誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞功能變化不能用微管的適應(yīng)性來解釋。此外,從肥胖的ZSF1心力衰竭大鼠模型的僵硬心臟中分離出的心肌細(xì)胞具有保留的射血分?jǐn)?shù),顯示出響應(yīng)于基質(zhì)硬化而卸載縮短的更顯著的減少。綜上所述,我們介紹了一種方法,該方法可以評(píng)估ECM特性對(duì)心肌細(xì)胞功能的影響,與僵硬基質(zhì)的被動(dòng)抑制成分分開。因此,它增加了一個(gè)重要的生理學(xué)相關(guān)工具來研究心肌細(xì)胞 - 基質(zhì)相互作用的功能后果。

二、確定凝膠剛度

使用Piuma納米壓痕儀(荷蘭Optics11,荷蘭阿姆斯特丹)與剛度為1 N m的壓痕探針結(jié)合測(cè)定*水合凝膠的剛度?1半徑為44μm(Optics11)。針對(duì)每種剛度的凝膠確定楊氏模量。對(duì)所有凝膠進(jìn)行九次單獨(dú)測(cè)量,以確定平均凝膠剛度。

三、結(jié)果

使用40%丙烯酰胺和2%雙歧桿菌的不同組合來獲得所需剛度的凝膠。凝膠的硬度旨在代表健康的心臟(~15 kPa)和患病的心臟(50-100 kPa)(Berry等人。2006年;恩格勒等人。2008年;威爾斯和迪舍爾,2008)。此外,還包括更合規(guī)的凝膠(8 kPa)和未經(jīng)處理的玻璃蓋玻片。表1列出了導(dǎo)致8、15、50和100 kPa剛度的丙烯酰胺和雙的混合物。

四、結(jié)論

目前的研究證明了一種易于使用的方法,用于研究基質(zhì)特性對(duì)心肌細(xì)胞功能的影響。此外,本文描述了一種模型,該模型提供了測(cè)量基質(zhì)誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞適應(yīng)的機(jī)會(huì),而不受基質(zhì)剛性的被動(dòng)影響。以前,不可能在培養(yǎng)的成年心肌細(xì)胞中分離這兩個(gè)收縮影響因素,因?yàn)檫@些細(xì)胞不能從其基質(zhì)中分離出來。我們的分離培養(yǎng)成人心肌細(xì)胞的新方法使得在沒有其他病理性ECM相關(guān)因素的情況下,研究基質(zhì)硬度改變對(duì)健康和患病心肌細(xì)胞心肌細(xì)胞功能的影響成為可能。因此,本文中描述的方法為研究心臟病中細(xì)胞外重塑的功能后果以及評(píng)估旨在保護(hù)/預(yù)防肌絲免受硬化ECM的有害影響的方法的治療效果增加了一個(gè)重要工具。

  

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