細菌內(nèi)毒素檢查法中凝膠法在藥品中造成異常結(jié)果的原因和解決方法
凝膠法實驗過程時間短,消耗樣品量少,且具有使用設(shè)備簡單,費用低等優(yōu)點,作為《中國藥典》“仲裁”檢查方法,廣泛用于注射劑藥品細菌內(nèi)毒素檢查。
1.干擾試驗的必要性
鱟試劑凝集反應是一種二價陽離子酶反應體系,有許多干擾反應的物質(zhì)會干擾凝膠的形成。在新樣品測定中,必須首先進行細菌內(nèi)毒素干擾試驗,確定是否存在干擾樣品出現(xiàn)縮合反應的因素。為了保證所選處理方案能夠在不滅活內(nèi)毒素情況下有效消除干擾,采用預先添加的標準內(nèi)毒素再處理液進行干擾試驗。
2.可能會出現(xiàn)的異常結(jié)果及其原因和解決方法
2.1造成呈假陰性的可能原因及解決方法
原因可能是:①內(nèi)毒素工作標準中存在的一些問題,如滴度標注不準確,過期或貯存不當導致失效,稀釋誤差或稀釋振蕩不夠,對照管沒有達到2λ陽性內(nèi)毒素濃度;②問題出在鱟試劑。例如,過期失效,振蕩不當,靈敏度標注不準確,會產(chǎn)生氣泡,鱟試劑酶蛋白變性,鱟試劑破壞;③溫控器溫度不符合要求或保溫時間不夠。
解決辦法包括:規(guī)范內(nèi)毒素標準效價的審查和鱟試劑在保質(zhì)期正確儲存和使用的敏感性;內(nèi)毒素稀釋應準確,確保PC管添加2λ內(nèi)毒素;當使用可溶解的鱟試劑時,沿著管壁慢慢加水,讓混合器振蕩30s。避免劇烈振動產(chǎn)生氣泡,確保恒溫器溫度和保溫時間正確。
2.2造成假陽性的可能原因及解決方法
原因可能包括:實驗設(shè)備受到污染,經(jīng)熱原、外源性內(nèi)毒素或微生物污染不能*滅活;試驗中由于誤操作造成的內(nèi)毒素污染;BET水不符合要求,內(nèi)毒素超標,培養(yǎng)溫度不正確等。解決方案包括:按照2015年版《中國藥典》的規(guī)定對實驗儀器進行處理;選擇合格的BET水,確保正確的培養(yǎng)溫度、時間和操作。
總而言之,細菌內(nèi)毒素檢查法已被列入許多國家藥典。方法學研究表明,用細菌內(nèi)毒素法取代家兔熱原法的藥物種類較多,因為它比家兔熱原法更精準、快速、簡捷、經(jīng)濟、容易推廣等諸多優(yōu)點。
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