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Trizol提取RNA的詳細(xì)步驟

來源:上海鹿森生物工程有限公司   2022年09月21日 15:20  

1、在提取組織RNA時(shí),每50~100mg組織用1ml Trizol試劑對(duì)組織進(jìn)行裂解;提取細(xì)胞RNA時(shí),先離心沉淀細(xì)胞,每5-10╳106個(gè)細(xì)胞加1ml Trizol后,反復(fù)用槍吹打或劇烈振蕩以裂解細(xì)胞。

2、將組織或細(xì)胞的Trizol裂解液轉(zhuǎn)入EP管中,在室溫15~30C下放置5分鐘;在EP管中,按照每1mlTRIZOL加0.2ml氯/仿的量加入氯/仿,蓋上EP管蓋子,在手中用力震蕩15秒,在室溫下(15℃~30℃)放置2~3分鐘后,12000g(2℃~8℃)離心15分鐘。

3、取上層水相置于新EP管中,按照每1mlTRIZOL加0.5ml異丙醇的量加入異丙醇,在室溫下(15℃~30℃)放置10分鐘,12000g(2℃~8℃)離心10分鐘。

4、按照每1mlTRIZOL加1ml 75%乙醇進(jìn)行洗滌,渦旋混合,7500g(2℃~8℃)離心5分鐘,棄上清;讓沉淀的RNA在室溫下自然干燥;用Rnase-freewater溶解RNA沉淀。

Ps:在收集到生物材料之后,最好馬上進(jìn)行RNA制備工作。若需暫時(shí)儲(chǔ)存,則應(yīng)以液氮將生物材料急速冷凍后,儲(chǔ)存于-80℃冷凍柜。在制備RNA時(shí),將儲(chǔ)存于冷凍柜的材料取出,立即以加入液氮研磨的方式打破細(xì)胞,不可以先行解凍,以避免RNase的作用。


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