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ELISA實驗中洗板機洗板關(guān)鍵點

來源:上海撫生實業(yè)有限公司   2022年10月10日 14:55  

洗板機洗板人為因素少,速度快,條件恒定,但是使用洗板機洗板時應(yīng)注意以下三個關(guān)鍵點。

1、洗滌參數(shù)

主要的參數(shù)是洗滌量。自動洗板機會分配洗滌液。如果你之前遭遇過高背景,那么不要猶豫,將洗滌量調(diào)為高,最好是比包被體積更高。太少的洗滌液會讓一部分分析表面洗滌不到,從而明顯增加背景。所有反應(yīng)孔的洗滌量必須相同。

江萊生物ELISA試劑盒的使用手冊中列出包被量。我們建議使用350µl洗滌液進(jìn)行洗滌,以便清潔整個反應(yīng)孔的壁。一般來說,洗滌量越高,則孵育步驟殘留的抗體或抗原量就越少。

2、洗滌次數(shù)

影響洗滌效果的主要參數(shù)是洗滌循環(huán)的量。當(dāng)然,洗滌次數(shù)越多,背景越低。然而,太多次的洗滌會降低信號強度,使其難以測定。通常的做法是在每次抗體或抗原孵育后重復(fù)洗滌三次。不過,一般而言,包被平板需要的洗滌次數(shù)比用戶包被的平板要少。對于用戶包被的ELISA板,必須優(yōu)化洗滌次數(shù)。

控制洗滌量和洗滌次數(shù)的另一種方法是加入過量的洗滌液。一般來說,96孔板的每個孔能容納330至460 µl。不過,有些自動化洗板機可設(shè)置程序,分配遠(yuǎn)遠(yuǎn)超出這個量的洗滌液,比如1 ml。它是如何做到的呢?其實很簡單,就是在分液的同時打開吸液功能。換句話說,隨著分液器分配更多的液體,抽吸器也將液體吸出。這種技術(shù)能增加洗滌量,但不會溢出到其他孔中。

3、抽 吸

還有一些參數(shù)會影響洗滌步驟的效果。這些參數(shù)包括吸液高度和吸入位置,這兩者都能調(diào)整,以降低背景(殘留量)和差異。

殘留液體中包含未結(jié)合的抗原或抗體,它們會增加背景信號。殘留量越小,殘留液體越少,轉(zhuǎn)移到下一步的干擾液體也就越少。

吸液高度會明顯影響殘留量;如果洗滌吸頭與反應(yīng)孔底部的距離稍大,那就會讓殘留量急劇增加。反之,如果洗滌吸頭壓著反應(yīng)孔底部,那么也會使吸液效率降低,殘留量增加。

目前的洗板機一般使用兩種類型的洗頭:剛性和浮動。浮動洗頭中的吸頭可在洗滌過程中自由上下移動,而剛性洗頭則固定在適當(dāng)?shù)奈恢?。使用剛性洗頭的洗滌操作在優(yōu)化起來更為復(fù)雜,因為你需要非常仔細(xì)地調(diào)整吸液高度。如果你們實驗室使用幾種不同的板,那可能會很耗時。在使用浮動洗頭時,吸頭會降到反應(yīng)孔的底部。調(diào)整高度就不是很重要,因此洗頭會下降到底部。

抽吸的位置也對殘留量有著重要影響;如果每個孔只使用一個抽吸點(這很常見,因為更快),那么抽吸的位置需要優(yōu)化。*佳的位置取決于洗頭的性狀,但它幾乎不在反應(yīng)孔的中間,即使這是所有洗頭常見的默認(rèn)位置。一般來說,最佳位置在孔中間與孔壁之間的某處。

反應(yīng)孔的形狀也會影響殘留量。C形底(平底圓角)的微孔板一般會比那些平底尖角的微孔板殘留量更低。

洗板時應(yīng)注意:

1.需每天校正注液量及殘液量,洗滌后殘液量不得大于2 μl。

2.及時更換破損吸液針,避免破壞底板包被。

3.針對不同酶標(biāo)板注意調(diào)整吸液頭下降高度,避免沖洗針頭卡住酶標(biāo)板。

4.注意調(diào)整洗液量,洗液量過多將溢出,過少將達(dá)不到洗滌效果。

5.關(guān)機前使用蒸餾水沖洗管道,避免洗液的結(jié)晶物堵塞管道。

6.不同種試劑盒的洗液嚴(yán)禁混合使用。

 

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