在大多數(shù)情況下,將基因轉(zhuǎn)染進(jìn)入有絲分裂后期的神經(jīng)細(xì)胞(如原核腦皮層核海馬趾神經(jīng)細(xì)胞)被證實(shí)是無(wú)效的。其他轉(zhuǎn)染方法如磷脂鈣/DNA共沉淀法、陽(yáng)離子脂質(zhì)體法或顯微注射法等對(duì)神經(jīng)細(xì)胞都是有毒的,他們通常導(dǎo)致被轉(zhuǎn)染的細(xì)胞存活率不到10,。經(jīng)改良后的病毒轉(zhuǎn)染法,如腺病毒核Semilki forest病毒具有較高的轉(zhuǎn)染率,單病毒載體的構(gòu)建是耗時(shí)的、并且伴有不安全的擔(dān)憂(yōu),病毒感染有可能感染蛋白質(zhì)的合成,更有甚者,由于病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)后蛋白表達(dá)的水平太高。
基因電轉(zhuǎn)染儀技術(shù)由兩部分組成:
1.轉(zhuǎn)染過(guò)程中,細(xì)胞首先懸浮在轉(zhuǎn)染試劑中,選擇相應(yīng)的轉(zhuǎn)染程序,僅需數(shù)秒鐘,轉(zhuǎn)染結(jié)束,將細(xì)胞轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)基中培養(yǎng)、觀察。針對(duì)不同的轉(zhuǎn)染細(xì)胞都有相應(yīng)的轉(zhuǎn)染試劑,配合相應(yīng)Amaxa轉(zhuǎn)染儀的程序,使DNA直接轉(zhuǎn)入細(xì)胞核內(nèi),轉(zhuǎn)染效率高,易操作,實(shí)驗(yàn)周期短。
2.原理是基于細(xì)胞特異性的細(xì)胞核轉(zhuǎn)染液和電穿孔技術(shù)的結(jié)合。
細(xì)胞特異性的細(xì)胞核轉(zhuǎn)染液為外源基因進(jìn)入細(xì)胞核提供友好界面,降低轉(zhuǎn)染過(guò)程對(duì)細(xì)胞的損傷。轉(zhuǎn)染技術(shù)有一般的電穿孔無(wú)法對(duì)比地優(yōu)點(diǎn),它具有電子參數(shù),每一套電子參數(shù)是作為一種程序去適應(yīng)不同的細(xì)胞類(lèi)型。由于電子參數(shù)是預(yù)先精心設(shè)計(jì)好的,因此操作者不用進(jìn)行電子參數(shù)的優(yōu)化、轉(zhuǎn)染條件的摸索等繁瑣的工作,您只需按動(dòng)按鈕選用規(guī)定的程序即可。
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