細(xì)胞基礎(chǔ)培養(yǎng)基其工作基礎(chǔ)是用合適的激索、營(yíng)養(yǎng)物和促貼壁的物質(zhì)的組合置換培養(yǎng)基中的成分,專門用于神經(jīng)細(xì)胞培養(yǎng),它的基礎(chǔ)培養(yǎng)基是1:1的DMEM與H12的混合液,添加了胰島素、轉(zhuǎn)鐵蛋白、黃體酗、腐胺和硒。胰島索和胰島索樣生長(zhǎng)因子對(duì)于大多數(shù)類型細(xì)胞的存活和生長(zhǎng)有巫要作用,硒是谷胱甘肽產(chǎn)生的合作因子,可能有助于過(guò)氧化物和超氧化物的水解,有報(bào)道說(shuō)還能防止細(xì)胞的光照損傷。
隨后的其他配方如N1N3則含有較低濃度的轉(zhuǎn)鐵蛋白。未料到的是上述配方構(gòu)成的培養(yǎng)基可以支持神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞系快速增殖,隨后又發(fā)展了能支持原代培養(yǎng)的各種神經(jīng)元生長(zhǎng)的培養(yǎng)基,這種培養(yǎng)基在許多實(shí)驗(yàn)室里已取代了有血清培養(yǎng)。在某些培養(yǎng)方案中,細(xì)胞直接進(jìn)入無(wú)血清培養(yǎng),這樣的培養(yǎng)基可以消除來(lái)自血清的不均一性。更為巫要的是,它們可用來(lái)檢測(cè)生長(zhǎng)因子以及其他促進(jìn)神經(jīng)元存活或生長(zhǎng)的因子,或者用來(lái)檢測(cè)那些可保護(hù)神經(jīng)元免遭環(huán)境毒物損傷的制劑。專用于神經(jīng)元的培養(yǎng)基在某些培養(yǎng)環(huán)境中還可以減低非神經(jīng)元細(xì)胞的增殖,故可使神經(jīng)元純化。
血清中含有的組分,例如血清蛋白,可作為代謝毒物清除劑使用并能聚集于培養(yǎng)基中。當(dāng)缺乏這些成分時(shí),如神經(jīng)元在無(wú)血清培養(yǎng)基中生長(zhǎng)時(shí),特別容易為過(guò)氧化物及自由基傷害,這己被許多研究者注意到了。過(guò)氧化物酶以及超氧化物歧化酶可阻止培養(yǎng)基中過(guò)氧化物和超氧化物的累積,有報(bào)道講可以促進(jìn)低密度培養(yǎng)細(xì)胞的存活。有學(xué)者發(fā)現(xiàn)細(xì)胞存活可為氧分壓的下降而促進(jìn)。因而,無(wú)血清培養(yǎng)基的配方常含有抗氧化劑的試劑。例如,維牛索E和丙酮酸,可作為過(guò)氧化物清除劑使用。上述這些影響在高密度培養(yǎng)時(shí)變小,特別是神經(jīng)元與膠質(zhì)共培養(yǎng)時(shí),它們可以吸收和代謝神經(jīng)元毒性物質(zhì)如谷氨酸。
應(yīng)該注意,盡管細(xì)胞基礎(chǔ)培養(yǎng)基是有化學(xué)限定性的,但在培養(yǎng)過(guò)程中它仍有變動(dòng),培養(yǎng)起始時(shí)可能有些物質(zhì)缺乏,而后細(xì)胞的產(chǎn)物可能積累,從而使培養(yǎng)基的成分改變。這其實(shí)是有另一方面的好處,即條件培養(yǎng)基(已培養(yǎng)過(guò)細(xì)胞的培養(yǎng)基)的形成,條件培養(yǎng)基常常用來(lái)增加神經(jīng)元和膠質(zhì)細(xì)胞的發(fā)育。
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