一.實驗前
1.1實驗用工器具的準備:檢測過程中用到的玻璃平皿需滅菌(濕熱滅菌121℃、30分鐘或干熱滅菌160℃、2小時)備用;剪刀、鑷子等需先用紗布包好,外包牛皮紙包好扎緊,滅菌(濕熱滅菌121℃、30分鐘);移液管、槍頭等用報紙包好扎緊,滅菌(濕熱滅菌121℃、30分鐘)。
1.2培養(yǎng)基及稀釋液的準備:根據(jù)檢驗樣品,計算出培養(yǎng)基與稀釋液的用量,按照比例進行配置,包好,根據(jù)培養(yǎng)基與稀釋液的屬性,進行濕熱滅菌,備用。
1.3潔凈服準備:將當(dāng)天所用潔凈服放入滅菌鍋中進行滅菌,備用;或使用已滅菌且在有效期內(nèi)的潔凈服。
1.4確保實驗潔凈區(qū)域通風(fēng),觀察潔凈室各個規(guī)定區(qū)域的壓差是否符合規(guī)定,若不符合,及時通知設(shè)備部門,進行調(diào)整。
二.實驗中
2.1將實驗所需的平皿、培養(yǎng)基、工器具、稀釋液放入傳遞窗中,打開紫外燈,照射30分鐘。
2.2進入潔凈區(qū)域,手清潔消毒,換上潔凈服,進入檢查室,打開潔凈工作臺通風(fēng),用消毒劑擦拭臺面,取出傳遞窗中照射后物品,按照使用先后順序置于潔凈工作臺上,擺好后紫外照射30分鐘,人員退出檢查室,紫外照射結(jié)束后,繼續(xù)通風(fēng)30分鐘,檢測人員方可進入檢查室進行實驗。
2.3實驗過程中需點酒精燈,拆開滅菌后包好的培養(yǎng)基外層,在近火焰處輕微灼燒培養(yǎng)基瓶口,打開瓶蓋,傾倒培養(yǎng)基至滅菌后的平板中,待冷凝后使用。
三.實驗后
3.1清潔及衛(wèi)生:做完實驗后,用消毒劑對操作臺面進行擦拭消毒,待實驗培養(yǎng)物和實驗廢棄物傳出潔凈區(qū)域后,使用純化水對地面進行清潔。
3.2培養(yǎng)及結(jié)果觀察:需氧菌平板應(yīng)在30-35℃下,培養(yǎng)3-5天,霉菌與酵母菌平板應(yīng)在20-25℃下,培養(yǎng)5-7天,空白與陰性對照應(yīng)無菌生長。
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