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1 ) 新鮮細(xì)胞：
裂解液的量不足，使得裂解不充分。
2 ) 新鮮組織：
某些含有內(nèi)源性核酸酶的樣品，很難避免RNA酶的降解，建議采用的方法為在液氮條件下將組織研碎，并且，勻漿時采用更多的裂解液。
3 ) 冷凍樣品：
樣品取材后應(yīng)該迅速置于液氮中冷凍存放，然后轉(zhuǎn)移到-70℃冰箱存放。如果未經(jīng)液氮速冷直接轉(zhuǎn)移到-70℃冰箱存放，會造成RNA緩慢降解。樣品研磨后，在液氮剛剛揮發(fā)完時，將樣品迅速轉(zhuǎn)移到含裂解液的容器中，立即混勻勻漿。
4 ) 外源 RNA 酶的污染：
試劑、器械等實驗用品應(yīng)該采用DEPC 水滅菌處理。
5 ) 內(nèi)源 RNA 酶的污染：
抑制劑失效或者用量不夠，實驗樣品過多或者勻漿溫度過高。
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