花青素是存在于許多水果和花朵中使之呈現(xiàn)亮紅色和藍(lán)色（和紫色）的天然色素。藍(lán)莓的顏色就是由水果中許多不同的花青素形成的。對(duì)花青素進(jìn)行定性和定量分析可以用來(lái)區(qū)分藍(lán)莓植物的品種和鑒定其品質(zhì)。因此，花青素的色譜分離在農(nóng)業(yè)和制酒業(yè)越來(lái)越受到重視。最近，對(duì)花青素作為抗氧化/抗癌劑醫(yī)藥作用的興趣促使了人們研究其色譜分離的興趣。

要點(diǎn)提示

• 通常，在這些分離中使用低 pH 值的流動(dòng)相（含有甲酸）會(huì)造成色譜柱鍵合相降解和分離改變(Goiffon, J.-P., Brun, M., and Bourrier, M.-J., J.Chromatogr. 537 101-121, 1991)。但 ZORBAXStableBond SB-C18 色譜柱能在很低 pH值的反相色譜分離條件下提供長(zhǎng)期的穩(wěn)定性

• 實(shí)驗(yàn)中使用磷酸取代傳統(tǒng)流動(dòng)相中添加的甲酸，結(jié)果在 ZORBAX SB-C18 色譜柱上實(shí)現(xiàn)了大于 25種花青素的更好的分離

• 鑒于產(chǎn)品的重復(fù)性和擁有窄粒徑分布的更小色譜填料 (3.5 µm)，分析人員可以通過(guò)系統(tǒng)地改變色譜柱規(guī)格來(lái)節(jié)約時(shí)間和溶劑

條件:ZORBAX SB-C18 (4.6 x 250 mm, 5 µm; 4.6 x 150 mm,3.5 µm; 4.6 x 75 mm; 3.5 µm)(安捷倫部件號(hào)分別為: 880975-902, 863953-902, 866953-902)流動(dòng)相: A: 3% 磷酸 B: * 甲醇, 梯度: (見(jiàn)各自色譜圖)進(jìn)樣: 20 µL, 1 mL/min, 30 ºC,檢測(cè): 紫外波長(zhǎng) (525 nm),樣品制備: (見(jiàn)背面)

制備藍(lán)莓提取物的方法*開(kāi)始混合: 10 g 藍(lán)莓10 ml 溶劑（ 70:28:2, 甲醇:水:甲酸）冰上混合10分鐘通過(guò)玻璃棉過(guò)濾至 10 ml 注射器濾液靜置1小時(shí)過(guò)0.2 µm 濾膜立即注入50 µL 進(jìn)行高效液相色譜分析