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色譜分離中，影響選擇性和分離的因素有很多，其中流動相中的有機(jī)溶劑類型以及不同的溶劑強(qiáng)度就是影響因素之一。對于反相色譜模式，常用的有機(jī)溶劑有甲醇、乙腈、四氫呋喃等，我們可以通過改變流動相中有機(jī)相種類或調(diào)整其比例，來改變選擇性和分離度，以呈現(xiàn)出不同的分離效果。
應(yīng)用實(shí)例
4-（氯甲基）苯甲酸&3-（氯甲基）苯甲酸的分離
結(jié)構(gòu)如圖所示：
兩種物質(zhì)為間位與對位異構(gòu)體，在乙腈體系下無法實(shí)現(xiàn)wan全分離。改變有機(jī)相種類后，可實(shí)現(xiàn)較好分離。
色譜條件1
色譜柱：Ultimate® XS-C18 4.6*250mm，5μm
流動相：0.1%磷酸水和乙腈，梯度洗脫
分析：兩目標(biāo)峰有分離趨勢，但分離不wan全，將梯度調(diào)整成等度條件。
色譜條件2
色譜柱：Ultimate® XS-C18 4.6*250mm，5μm
流動相：0.1%磷酸水/乙腈=70/30
分析：分離有改善，但還是無法分離wan全，且依靠調(diào)整溶劑強(qiáng)度已無法改善其分離。
色譜條件3
在該色譜柱柱上進(jìn)行方法優(yōu)化，用甲醇替換乙腈，再次進(jìn)行測試
色譜柱：Ultimate® XS-C18 4.6*250mm，5μm
流動相：0.1%磷酸水/甲醇=60/40
結(jié)果：兩目標(biāo)物峰型良好，且可實(shí)現(xiàn)wan全分離。
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