細(xì)胞成團(tuán)的原因有哪些？

1.  消化的過(guò)程過(guò)于粗暴，吹打太用力，消化過(guò)久，消化液太強(qiáng)或有毒性等會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞死亡。細(xì)胞死亡后會(huì)釋放出DNA，纏繞其他細(xì)胞，形成黏性的細(xì)胞團(tuán)。

2、細(xì)胞離心速度過(guò)大或時(shí)間太長(zhǎng)，也容易造成細(xì)胞抱團(tuán)。

3、消化不全的時(shí)候，細(xì)胞和細(xì)胞之間的連接沒(méi)有分開(kāi)；消化過(guò)度的時(shí)候，圓形的細(xì)胞容易聚堆，再分開(kāi)很困難。

4、狀態(tài)不好、老化的細(xì)胞，也可能會(huì)出現(xiàn)抱團(tuán)生長(zhǎng)的情況（比如換液不及時(shí)、長(zhǎng)得太滿才傳代、污染等造成的細(xì)胞狀態(tài)差）。

5、傳代時(shí)沒(méi)有吹打均勻，細(xì)胞團(tuán)多，培養(yǎng)時(shí)就會(huì)是一團(tuán)一團(tuán)的。

6、非震蕩培養(yǎng)或細(xì)菌（胞）量過(guò)多的話就會(huì)成團(tuán)。

如何避免細(xì)胞成團(tuán)的現(xiàn)象？

首先確認(rèn)當(dāng)前細(xì)胞生長(zhǎng)密度及狀態(tài)，80%左右的生長(zhǎng)密度即可進(jìn)行傳代，此時(shí)細(xì)胞狀態(tài)較好，且用于傳代的數(shù)量也足夠。

傳代操作前，使用緩沖液對(duì)細(xì)胞進(jìn)行適當(dāng)且全面地潤(rùn)洗，清除死亡的細(xì)胞團(tuán)和部分堆疊雜質(zhì)(在選擇適當(dāng)胰酶濃度時(shí)，對(duì)于不同代數(shù)的不同細(xì)胞系需進(jìn)行一定的調(diào)整，如：部分貼壁牢固的細(xì)胞應(yīng)將胰酶分裝后，進(jìn)行預(yù)熱處理;細(xì)胞密度過(guò)高時(shí)，應(yīng)該向胰酶中加入少量緩沖液，緩慢均勻地消化細(xì)胞等。對(duì)于貼壁格外牢固的細(xì)胞，可以嘗試多次分批進(jìn)行消化，限度保證細(xì)胞狀態(tài))。

在消化過(guò)程中，需均勻慢速晃動(dòng)培養(yǎng)器皿，以免局部胰酶濃度過(guò)高而影響傳代。切勿用力搖動(dòng)，導(dǎo)致邊緣松動(dòng)的大片細(xì)胞直接脫落，從而增加細(xì)胞成團(tuán)幾率。培養(yǎng)器皿的選擇也需注意，部分實(shí)驗(yàn)室會(huì)使用玻璃培養(yǎng)瓶，因細(xì)胞貼壁在玻璃底更容易分離。同時(shí)玻璃材質(zhì)的親水性和塑料有區(qū)別，而且玻璃細(xì)胞培養(yǎng)瓶都是實(shí)驗(yàn)室內(nèi)部處理，可能會(huì)有清潔殘留，在一定程度上抑制細(xì)胞的貼壁生長(zhǎng)，并且更容易消化，細(xì)胞之間的連接比貼壁還要緊密，聚團(tuán)幾率很大。

另外，避免傳代過(guò)程中匯合度較大，本身1:3甚至1:4都可以正常培養(yǎng)的細(xì)胞被1:2傳代，會(huì)導(dǎo)致母代細(xì)胞濃度過(guò)高，在分化過(guò)程中出現(xiàn)堆疊現(xiàn)象

適當(dāng)?shù)奶幚砗驮O(shè)備使用，也可以減少成團(tuán)。如果使用離心機(jī)分離或混合樣品，將其設(shè)置為正確的速度可以減少聚團(tuán)，通常情況下，較快的速度可以離心散細(xì)胞，但在高速下也必須考慮細(xì)胞的脆弱性。

細(xì)胞成團(tuán)了，如何處理？

1.如果細(xì)胞抱團(tuán)不影響生長(zhǎng)就沒(méi)問(wèn)題，只是計(jì)數(shù)時(shí)較麻煩。在消化時(shí)，可在細(xì)胞由多角形變成圓型之前，用手輕磕培養(yǎng)瓶的側(cè)壁，使細(xì)胞從壁上脫落（見(jiàn)意不要吹打，對(duì)細(xì)胞形狀和生長(zhǎng)都不好）。 

2.如果感覺(jué)有死細(xì)胞的DNA，在細(xì)胞懸液中加入幾滴無(wú)菌的DNAse()（1mg/ml溶于水）將DNA鏈打斷。輕柔地吹打細(xì)胞，防止對(duì)細(xì)胞膜造成物理?yè)p傷。