關(guān)于鱟試驗法中假陽性結(jié)果的解決方法
樣品中混入細菌內(nèi)毒素發(fā)生凝集,由形成凝膠的有無來檢測樣品中的內(nèi)毒素,然而鱟試劑除了內(nèi)毒素反應(yīng)外,它同時也會對內(nèi)毒素以外的其他物質(zhì)存在凝集反應(yīng)。因此,勢必會形成假陽性或假陰性的實驗結(jié)果。這就是鱟試驗法中的特異性問題。
對于假陽性結(jié)果的問題,可以說十分復(fù)雜。因為對于大多數(shù)樣品來說,主要都為假陰性情況較多,而對于假陽性結(jié)果的判斷和排除是很困難的。當我們對一個樣品用鱟試驗法檢測出陽性結(jié)果時,一可以說是由于內(nèi)毒素超過限值所引起,二也可以理解為假陽性結(jié)果。因此我們在實驗時要特別注意區(qū)分。
在假陽性結(jié)果的研究過程中,最-突出的是有關(guān)G因子反應(yīng)系被激活所形成的凝膠化反應(yīng),即一般的鱟試劑由于含有G因子也可被(1,3)-β-D-glucan(葡聚糖)所激活而使產(chǎn)生凝集反應(yīng),從而形成假陽性結(jié)果。
關(guān)于(1,3)-β-D-glucan:它是在1981年由Adinuma所發(fā)現(xiàn)一種抗癌藥,能使鱟試劑產(chǎn)生凝固。國外報道該物質(zhì)在10ng/ml時就可使鱟試劑凝固。根據(jù)我們的試驗發(fā)現(xiàn)不同廠家的鱟試劑可在2.5 ~10ng/ml范圍內(nèi)使鱟試劑凝固。該物質(zhì)廣泛存在于擔子菌、真菌、地衣類、酵母和藻類的菌體成分中。另外,某些用人造纖維造的人工腎透析膜上也含有類似物質(zhì),但它可引起家兔升溫。
(1,3)-β-D-glucan對熱極為穩(wěn)定。高壓121℃并不能使其滅活。需250℃2小時加熱滅菌才能使其滅活。因此,要想防止假陽性結(jié)果的產(chǎn)生,就必須要排除(1,3)-β-D-glucan,使其不能激活G因子而形成凝膠。
國外在80年代后對此進行了許多的研究和改進。目前已開發(fā)出僅對內(nèi)毒素起反應(yīng)的專一鱟試劑。只與內(nèi)毒素起反應(yīng)的鱟試劑有:日本生化學(xué)工業(yè)株式會社生產(chǎn)的Endospecy,它是將東方鱟裂解液中各組分提取后重組,重組時不加G因子,另一種是日本和光純藥株式會社生產(chǎn)的ES =Ⅱ,它是美洲鱟裂解液中加入大刃羧甲基curdaln封閉G因子。同時國外也開發(fā)出只與(1,3)-β-D-glucan起反應(yīng)的鱟試劑:由蠶中提取而來的新型的SLP試劑。(和光)以及日本化學(xué)工業(yè)株式會社生產(chǎn)的Gluspecy。
對于大多數(shù)樣品來說,由于使用特異性鱟試劑與非特異性鱟試劑對其結(jié)果是沒有差異的。因此在一般情況下可以不必考慮,只有在確實認定有干擾時,才考慮使用特異性鱟試劑以排除干擾。
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