刀豆蛋白A(Concanavalin A,縮寫ConA)是一種糖類結(jié)合蛋白質(zhì),又叫刀豆球蛋白A、伴刀豆球蛋白、刀豆素、刀豆凝集素,是一種植物血凝素,具有強力的促有絲分裂作用,有較好的促淋巴細胞轉(zhuǎn)化反應的作用,其促淋巴細胞轉(zhuǎn)化最適濃度為40-100μg/ml,能沉淀肝糖原,凝集羊、馬、狗、兔、豬、大鼠、小鼠、豚鼠等動物及人紅細胞。還能選擇性激活抑制性T細胞(Ts)細胞,對調(diào)節(jié)機體免疫反應具有重要作用。
結(jié)構(gòu)特性:
自刀豆和豌豆等籽粒中提取而得的一種植物凝集素。為四聚體球蛋白,分子量102000。每個亞基含237個氨基酸殘基,分子量25500,結(jié)合一個Ca2+和一個Mn2+,含一個糖結(jié)合部位。能與α-甘露糖、α-葡萄糖(細胞膜糖蛋白上)專一地結(jié)合,結(jié)合位點要求是α-D-吡喃甘露糖或α-D吡喃葡萄糖六元環(huán)中的C-3/C-4和C-6未被取代羥基。能與以α-1,2糖苷鍵連接的甘露二糖和甘露三糖有最大的親和力。
提取分離:
以新鮮刀豆種子為原料,提取刀豆中凝集素的最佳溶劑是甲酸溶液,凝集素提取的最/優(yōu)工藝條件為:提取溫度為22℃、提取時間為2.5h、甲酸溶液中NaCl 濃度為0.20mol/L、甲酸濃度為0.7mol/L、料液比為1:50(W/V)。提取所得刀豆凝集素活力為102.96HU/g、蛋白質(zhì)提取量為11.15mg/g。凝集素提取液經(jīng)硫酸銨分級沉淀、透析等處理后得到刀豆凝集素(SJL)粗品。經(jīng)HPLC 分析表明,刀豆凝集初步分離產(chǎn)物的組分較為復雜,有多種不同分子量的蛋白質(zhì)構(gòu)成,分子量分布范圍較廣,從150000D到1300D左右。分子量為71000D左右的組分占22.65%,分子量為36000D左右的組分占15.55%。這說明初步分離產(chǎn)物中刀豆凝集素的含量較高。
穩(wěn)定性:
由酸堿穩(wěn)定性試驗可知,在極/端pH 值條件下,ConA產(chǎn)生不可逆變性,活力喪失。因此,在今后進行刀豆凝集素的滅活方面研究時,可采用稀堿溶液浸提,并控制一定的pH值,從而滅活大部分的ConA 活力。
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