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原代細(xì)胞培養(yǎng)過程中的常見問題

來源:上海佰利萊生物科技有限公司   2022年11月16日 09:04  

原代細(xì)胞與細(xì)胞系有什么區(qū)別?

  根據(jù)傳統(tǒng)定義,自組織第一次收獲和接種的細(xì)胞被稱為原代細(xì)胞 [Freshney, R.I. (1987). Culture of Animal Cells. A Manual of Basic Technique. (New York, Alan R. Liss, Inc.)]. 這類細(xì)胞直接從組織分離,生命周期有限,經(jīng)數(shù)次傳代后會(huì)逐漸停止生長。原代細(xì)胞在有限的生命周期內(nèi)需掌握好細(xì)胞的最大生長空間,以保持細(xì)胞群中基因型和表型的一致性。

  細(xì)胞系是不斷生長、分化的細(xì)胞群,因其經(jīng)過遺傳改造,致使其具有無限增長的潛能。體外生長的細(xì)胞系用于醫(yī)療或科研。

  倍增和代數(shù)有什么區(qū)別?

  倍增是培養(yǎng)物中細(xì)胞總數(shù)的翻倍,通常是指細(xì)胞指數(shù)或?qū)?shù)生長期。代數(shù)是指細(xì)胞群從培養(yǎng)瓶中移出,傳代培養(yǎng)過程的次數(shù),傳代培養(yǎng)的目的,是使細(xì)胞處于低密度以刺激其進(jìn)一步生長。

  接收到的凍存細(xì)胞該如何處理?

  收到包裝箱后,立即將凍存細(xì)胞從干冰移入液氮中凍存。此過程盡量快,以避免升溫。不要將細(xì)胞儲(chǔ)存在-80℃,這樣會(huì)對(duì)細(xì)胞造成不可挽回的傷害。

  凍存的細(xì)胞該如何開始培養(yǎng)?

  (1) 將一管細(xì)胞從液氮罐中取出,注意保護(hù)手和眼睛。

  (2) 將凍存管快速的放入37℃水浴中,輕輕握住并旋轉(zhuǎn),直到管內(nèi)物體wan全融化。

  (3) 將凍存管立即從水浴中拿出,擦干,轉(zhuǎn)入無菌環(huán)境。

  (4) 用70%的酒精沖洗凍存管,然后擦去多余酒精。

  (5) 打開蓋子,注意手指不要碰到里面的螺紋(注意,由于凍存管有負(fù)壓,開蓋時(shí)可能會(huì)有少量溢出,這是正?,F(xiàn)象)。

  (6) 用多聚賴氨酸(或參照說明書)包被培養(yǎng)瓶。多數(shù)細(xì)胞推薦的接種密度為每平方厘米5000個(gè)細(xì)胞。

  (7) 蓋好培養(yǎng)瓶的蓋子,輕輕搖晃培養(yǎng)瓶以使細(xì)胞分布均勻。若需要?dú)怏w交換可打開蓋子。

  (8) 將培養(yǎng)瓶放入培養(yǎng)箱中(37℃,5%CO2,95%空氣)

  (9) 放入培養(yǎng)箱后第6-16小時(shí)更換一次培養(yǎng)基,以去除殘留的二甲基亞楓和未貼壁的細(xì)胞。

  細(xì)胞培養(yǎng)過程中,多久更換一次培養(yǎng)基?

  這取決于細(xì)胞生長的速度。一般而言2-3天更換一次培養(yǎng)基,許多細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室通常在周一,周三,周五更換培養(yǎng)基。

  注意:凍存細(xì)胞復(fù)蘇后,在6-16小時(shí)內(nèi)更換培養(yǎng)基,以去除殘留的二甲基亞楓和死亡的細(xì)胞。

  可以擴(kuò)增培養(yǎng)和再次凍存原代正常人類細(xì)胞嗎?

  這取決于細(xì)胞的類型。一些細(xì)胞類型像神經(jīng)細(xì)胞,神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞和一些生長緩慢的上皮細(xì)胞,不推薦擴(kuò)增培養(yǎng)和再次凍存。其它的細(xì)胞類型像成纖維細(xì)胞、星形細(xì)胞、腎系膜細(xì)胞、星形膠質(zhì)細(xì)胞等等,可以擴(kuò)增培養(yǎng)和再次凍存。

  然而,需要注意的是再次凍存的過程可能導(dǎo)致細(xì)胞生長性能的改變。

  培養(yǎng)瓶中應(yīng)該加入多少體積的培養(yǎng)基?

  我們推薦的用量為:T-25培養(yǎng)瓶5ml,T-75培養(yǎng)瓶15ml,T-150培養(yǎng)瓶30ml。


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