一、溶解

1. 離心

收到的管子內(nèi)為凍干粉，開(kāi)蓋前要快速離心10000-12000rpm x 30s。

2. 溶解

選擇合適的溶解液，溶解到后邊的濃度范圍內(nèi)。如此可以確保蛋白充分溶解復(fù)性，保證產(chǎn)品質(zhì)量，請(qǐng)不要使用非建議溶液溶解。

目的是使細(xì)胞因子從無(wú)活性的凍干粉狀態(tài)充分溶解復(fù)性成為有活性的蛋白溶液。

注意：不要用渦旋振蕩儀劇烈渦旋，可以用槍頭輕輕吹打幾次助溶。有的細(xì)胞因子溶解比較慢，需要在室溫靜置或者搖床低速搖一段時(shí)間使充分溶解。

3.短期儲(chǔ)存

溶解后的蛋白溶液可以在2-8度儲(chǔ)存1周。

4.長(zhǎng)期儲(chǔ)存

如果您的實(shí)驗(yàn)，一周內(nèi)不能用完。必須將第2步中獲得的溶液用含載體蛋白的溶液進(jìn)一步稀釋。(詳見(jiàn)：三、稀釋)

目的是對(duì)溶解一步的蛋白溶液進(jìn)行稀釋凍存。加入載體蛋白可以封閉掉管壁上的蛋白結(jié)合位點(diǎn)，且可以在低溫下維持細(xì)胞因子的穩(wěn)定。

三、稀釋

1. 配制

配制0.1%BSA或者10%FBS或者5%海藻糖備用(確保無(wú)菌)，這三種稀釋液的配制的Buffer可以用PBS或者細(xì)胞基礎(chǔ)培養(yǎng)基。使用以上三種稀釋液的任意一種稀釋重懸的蛋白溶液，稀釋濃度根據(jù)您的使用濃度確定，不要低于10ug/ml。即可分裝成小管，凍存在-20--80度。

2.使用方法

使用時(shí)取用一支凍存的細(xì)胞因子，加入到您的培養(yǎng)基中至使用濃度。細(xì)胞因子應(yīng)避免反復(fù)凍融。