某些熒光物質在一定條件下,羊源性成分核酸檢測PCR-熒光探針試劑盒既能與抗原或抗體結合。又不影響抗原與抗體的特異性結合。用熒光抗原或熒光抗體對待檢標本染色后,在熒光顯微鏡下觀察,可看到發(fā)出熒光的抗原抗體復合物。作為蛋白質標記用的熒光物質需具備如下條件:①有與蛋白質分子形成穩(wěn)定共價鍵的化學基團,但不形成有害產(chǎn)物;②熒光效率高,與蛋白質結合的需要量少;③結合物在一般條件下穩(wěn)定,結合后又不影響免疫活性;④作為組織學標記,結合物的熒光必須與組織的自發(fā)熒光有良好的反襯;⑤結合程序簡單,能制成直接應用的商品。滿足這些要求的熒光物質有硫氰酸熒光素(FITC)、四乙基羅丹明(RB20())和四異甲基羅丹明(TMRITC)等,其中應用較廣的是異硫氰酸熒光素。熒光抗體(抗原)染色法有以下幾類:
1.羊源性成分核酸檢測PCR-熒光探針試劑盒直接法 直接滴加2~4個單位的標記抗體于標本區(qū),置試盒中.于37℃染色30min,然后置大量pH7.O~7.2的磷酸緩沖液(PBS)中漂洗15min,干燥,封載即可鏡檢。
2.雙層法標本先滴加朱標記的抗血清,置濕盒內。37℃30min。漂洗后,再用標記的抗抗體染色37℃30min.漂洗、干燥、封載。
3.夾層法本法主要用于檢測組織中的Ig。標本先用相應的可溶性抗原處理,漂洗后再用與該檢Ig有共同特異性標記抗體染色。
4.熒光抗體抗補體染色法用熒光標記抗補體抗體,即可用以示蹤能進行補體結合的任何抗原抗體系統(tǒng)。將已滅活的抗血清與1:10稀釋血清混合,滴加于標本上,37℃30~60min,漂洗后,羊源性成分核酸檢測PCR-熒光探針試劑盒再用抗補體染色37℃30min,漂洗、干燥、封載、鏡檢。
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