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食品中霉菌檢測(cè)常見(jiàn)問(wèn)題,你都解決了嗎?

來(lái)源:北京智云達(dá)科技股份有限公司   2022年11月23日 15:41  

不是分類(lèi)學(xué)上的名詞,而是一些絲狀真菌的通稱(chēng),屬真菌的一部分;其對(duì)人類(lèi)具有雙重性,有利的方面是它可以用來(lái)釀造、工業(yè)發(fā)酵、抗生素和?制劑的生產(chǎn)等,不利方面是它能引起農(nóng)副產(chǎn)品、食品、原料及器材的腐爛,也感染并引起人類(lèi)和動(dòng)、植物的多種疾病,少數(shù)種類(lèi),如黃曲ù,能產(chǎn)生黃曲ù毒素,黃曲ù毒素是一種致癌物質(zhì),Σ害人、畜的健康和生命。因此,ù菌的檢測(cè)對(duì)于食品的安全性很重要。

 

食品中常見(jiàn)的ù菌:?ù屬、根ù屬、曲ù屬、青ù屬等。


中的注意事項(xiàng)


1、 取樣的代表性。

 

2、 取樣工具的無(wú)菌。空氣中ù菌的孢子含量很高,所以,取樣的工具、容器等要經(jīng)過(guò)嚴(yán)格的高壓滅菌。


3、 檢樣的方法。

(1)由于ù菌易被攜帶,所以,檢樣時(shí)操作人員應(yīng)盡量避免自身攜帶的可能。

 

(2)樣品的均質(zhì)及充分振搖。因?yàn)橛行╂咦邮沁B成串的,故均質(zhì)和振搖能使其充分散開(kāi),同時(shí),在各梯度連續(xù)稀釋時(shí),也要用滅菌吸管反復(fù)吹吸幾次,使孢子充分散開(kāi)。

 

4、培養(yǎng)溫度和時(shí)間。培養(yǎng)溫度 25-28℃培養(yǎng),5 天后觀(guān)察。

ù菌檢驗(yàn)中常用的培養(yǎng)基:孟加拉紅瓊脂、馬鈴薯葡萄糖瓊脂、察氏瓊脂、高鹽察氏瓊脂等。

 

5、檢樣中常見(jiàn)的問(wèn)題。

(1) 不同稀釋度計(jì)數(shù)結(jié)果不相同;

(2) 不生長(zhǎng)或生長(zhǎng)很好連成片無(wú)法計(jì)數(shù);

原因:

①稀釋時(shí)δ經(jīng)反復(fù)振搖,吹吸,導(dǎo)致孢子δ充分散開(kāi),影響了計(jì)數(shù)的結(jié)果。

②由于培養(yǎng)基不適宜,PH 值低等,致使生長(zhǎng)較慢。

 

③觀(guān)察時(shí)間的掌握。真菌生長(zhǎng)較慢,故需 5d 后才能觀(guān)察出結(jié)果。

 

微生物操作中常見(jiàn)問(wèn)題的討論與分析

1、 劃線(xiàn)獲得單個(gè)菌落的方法。劃不出單個(gè)菌落的原因:

(1) 平板上有過(guò)多的水分;

(2) 劃線(xiàn)時(shí)接種環(huán)δ經(jīng)反復(fù)灼燒;

(3) 多區(qū)劃線(xiàn),三區(qū)或四區(qū)劃線(xiàn)。

 

2、 涂布和傾注的區(qū)別:

涂布利于觀(guān)察,但由于涂布棒上會(huì)帶有少量的菌液,可能影響計(jì)數(shù)的準(zhǔn)確性;傾注更為準(zhǔn)確,但不利于觀(guān)察菌落的狀態(tài)。

Beuchat和Matsuda等人分別對(duì)這兩種方法作了大量比較試驗(yàn)后發(fā)現(xiàn),對(duì)ù菌計(jì)數(shù)來(lái)說(shuō),涂抹法有以下幾方面*于傾注法:

①培養(yǎng)出的ù菌菌落數(shù)較多;

②培養(yǎng)所需的時(shí)間較短;

③ù菌孢子、菌落形態(tài)特征發(fā)育,便于鑒定。這是因?yàn)榻^大多數(shù)ù菌是好氧的,在培養(yǎng)基表面生長(zhǎng)快,發(fā)育好,而混在培養(yǎng)基中發(fā)育就受影響,而且在培養(yǎng)基傾注時(shí)ù菌孢子易受熱損傷。

 

3、培養(yǎng)基的選擇

培養(yǎng)基的選擇應(yīng)根據(jù)實(shí)驗(yàn)材料和檢驗(yàn)?zāi)康膩?lái)確定。目前國(guó)標(biāo)方法中使用的培養(yǎng)基有:馬鈴薯葡萄糖瓊脂(PDA)、孟加拉培養(yǎng)基(RBC)、高鹽察氏培養(yǎng)基(CAO),其中PDA和RBC適合于一般的ù菌和酵母菌生長(zhǎng),而CAO則適合于高滲性ù菌生長(zhǎng),酵母菌幾乎不長(zhǎng)。


在日常檢測(cè)中我們發(fā)現(xiàn),有些常見(jiàn)的耐高滲性ù菌,如局限曲ù、謝瓦曲ù、赤曲ù、Wallemia等在PDA、RBC上生長(zhǎng)非常緩慢或不長(zhǎng),而這些菌在高滲培養(yǎng)基如M40Y、DG18則正常生長(zhǎng)。孢子、形態(tài)特征發(fā)育良好,而且酵母菌也能在M40Y、DG18上生長(zhǎng),因此,若能同時(shí)采用PDA和M40Y(或DG18)分離培養(yǎng)各類(lèi)樣品中的ù菌,將能更全面地反映出污染ù菌的菌相。特別是對(duì)干燥食品、高糖食品、淹漬食品等,更有必要同時(shí)采用M40Y或DG18。


由于ù菌中很多種類(lèi)不會(huì)產(chǎn)生有毒的ù菌毒素,Σ害較小,而有的菌株即使污染數(shù)量不多,但其產(chǎn)生的ù菌毒素卻Σ害較大,因此僅作ù菌計(jì)數(shù)并不能全面反映其Σ害程度,重要的是要知道污染菌的菌相,才能更好地判斷被污染食品的安全程度。


為此,國(guó)外有些研究者設(shè)計(jì)出各類(lèi)選擇性培養(yǎng)基,可以識(shí)別產(chǎn)毒的ù菌。如AFPA培養(yǎng)基用于分離黃曲ù毒素產(chǎn)生菌高污染率的食品。產(chǎn)黃曲ù毒素的菌株黃曲ù和寄生曲ù在AFPA上30℃培養(yǎng)2~3天就形成背面有亮橙黃色的特征性菌落,非常容易識(shí)別。有人利用該培養(yǎng)基分離黃曲ù高污染食品花生、玉米等,取得了滿(mǎn)意的結(jié)果。因此,針對(duì)不同樣品,有目的地設(shè)計(jì)出相應(yīng)的選擇性培養(yǎng)基,以篩選污染菌中的Σ險(xiǎn)菌群,將是一個(gè)值得探索的方向。


4、 培養(yǎng)基配制時(shí)應(yīng)注意的問(wèn)題:

(1)滅菌溫度要嚴(yán)格控制,按照要求滅菌,尤其含糖量較高的培養(yǎng)基溫度不應(yīng)太高,過(guò)高會(huì)導(dǎo)致糖分焦化,影響質(zhì)量;

(2)瓊脂培養(yǎng)基不能反復(fù)溶化。反復(fù)溶化會(huì)破壞培養(yǎng)基中的營(yíng)養(yǎng)成分;

(3)培養(yǎng)基不能反復(fù)滅菌,反復(fù)滅菌也會(huì)導(dǎo)致?tīng)I(yíng)養(yǎng)成分的破壞;

(4)含瓊脂的培養(yǎng)基滅菌后,要搖勻。

 

5、 平板的保存:

大多數(shù)平板如 VRBA、DC、尿素?生化管、顯色系列等要避光低溫保存。

 

6、 產(chǎn)品的保存:

(1) 干粉培養(yǎng)基:避光干燥,結(jié)塊后不能使用。

(2) 亞碲酸鉀卵黃增菌液、50%卵黃乳液等:冷凍保存,使用時(shí),要常溫解凍,避免水浴加熱。

(3) 抗生素類(lèi):冷藏保存,溫度過(guò)高會(huì)導(dǎo)致靈敏度的下降。

(4) 兔血漿:冷藏保存少量的紅色不會(huì)影響結(jié)果。

 

7、 觀(guān)察時(shí)間的掌握:

按 SN、GB 等標(biāo)準(zhǔn)或培養(yǎng)基的使用說(shuō)明所述時(shí)間進(jìn)行觀(guān)察,時(shí)間過(guò)短或時(shí)間過(guò)長(zhǎng),單菌落的特征都不會(huì)很明顯。如單增李斯特氏菌顯色培養(yǎng)基,時(shí)間短單菌落看不到卵磷脂環(huán),時(shí)間長(zhǎng)綿羊李氏菌也會(huì)產(chǎn)生沉淀環(huán)。OXA、PALCAM的觀(guān)察也如此,時(shí)間過(guò)長(zhǎng),李氏菌使整個(gè)平板成黑色,不利于觀(guān)察單個(gè)菌落。

 

8、 添加劑的添加:

(1)溫度的掌握。卵黃和抗生素類(lèi)添加的溫度都不應(yīng)太高。

(2)定量。過(guò)多會(huì)抑制一些目標(biāo)菌,太少又導(dǎo)致雜菌的過(guò)度生長(zhǎng)。

 

8、 培養(yǎng)溫度的掌握:

(1)真菌類(lèi)。25-28℃培養(yǎng)

(2)細(xì)菌類(lèi)。李氏菌在增菌和生化中要求培養(yǎng)溫度在 30℃左右。

(3)其他一般在 36℃左右。

 

9、 接種方法:

常用的方法主要有劃線(xiàn)、三點(diǎn)接種、穿刺接種、傾注接種、涂布接種、液體接種。

 

10、革蘭氏染色方法:

染色時(shí)間的掌握、沖洗的方法。

 

11、最適計(jì)數(shù)范Χ

ù菌菌落由孢子和菌絲組成,相當(dāng)擴(kuò)散,在直徑9cm的平皿里,菌落數(shù)稍多就相互交叉重疊,影響計(jì)數(shù),但數(shù)量太少又會(huì)產(chǎn)生較大的誤差,因此選擇適當(dāng)?shù)南♂尪扔?jì)數(shù)是保證結(jié)果準(zhǔn)確的關(guān)鍵環(huán)節(jié)之一。


我們對(duì)這方面作了一些觀(guān)察研究,首先是將實(shí)驗(yàn)菌株的斜面培養(yǎng)物制成含有約106個(gè)/mL的孢子懸液,并用血球計(jì)數(shù)器在顯微鏡下準(zhǔn)確計(jì)數(shù),然后將孢子懸液作10-1~10-6倍稀釋?zhuān)〔煌♂尪鹊南♂屢航臃N于PDA,25℃培養(yǎng)5天后計(jì)數(shù)。30種常見(jiàn)ù菌的兩種不同計(jì)數(shù)方法所得結(jié)果比較顯示,大部分菌株?平板含有10~50個(gè)菌落的稀釋度時(shí)的計(jì)數(shù)與顯微鏡計(jì)數(shù)結(jié)果接近;有近一半的菌株,?個(gè)平板含50~100個(gè)菌落已較難計(jì)數(shù),而大部分菌株,超過(guò)100個(gè)/平皿或小于10個(gè)/平皿的計(jì)數(shù)結(jié)果就與顯微計(jì)數(shù)結(jié)果存在較大差別,因此,應(yīng)盡量選擇10~50個(gè)/平皿的稀釋度進(jìn)行ù菌計(jì)數(shù)。


而對(duì)上述提及的菌絲很豐富、菌落特別擴(kuò)散的?ù、根ù、犁頭ù等菌株,則應(yīng)在更少的范Χ內(nèi)計(jì)數(shù)(30個(gè)/平皿以?xún)?nèi))。為控制ù菌的生長(zhǎng)速度和菌落的生長(zhǎng)范Χ,可在培養(yǎng)基中添加少量抗生素,如氯ù素(50~100mg/L),金ù素(20~100mg/L),慶大ù素(50mg/L),土ù素(100mg/L)等。


12、關(guān)于殺菌的幾個(gè)概念:

(1)抑制:是在亞抑制劑量因子作用下導(dǎo)致微生物生長(zhǎng)停止,但在移去這些因子后生長(zhǎng)仍可以恢復(fù)的生物學(xué)現(xiàn)象。

(2)死亡:在致死劑量因子的作用下或在亞致死劑量因子長(zhǎng)時(shí)間的作用下,導(dǎo)致微生物生長(zhǎng)能力不可逆喪失,即使移去這種因子后生長(zhǎng)仍不能恢復(fù)的生物學(xué)現(xiàn)象。

(3)防腐:在某些化學(xué)物質(zhì)或物理因子作用下,能防止或抑制微生物生長(zhǎng)的一種措施,它能防止食物變質(zhì)或防止食物ù變。

(4)消毒:利用某種方法殺死或滅活物質(zhì)或物體中所有原微生物的一種措施,它可以起到防止感染和傳播的作用。

(5)滅菌:利用某種方法殺死物體中包括芽孢在內(nèi)的所有原微生物的一種措施。

 


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