操作步驟
1 .標準曲線的繪制
(1) 配置標準牛血清白蛋白溶液:在分析天平上精確稱取 0.025g 結(jié)晶牛血清白蛋白,倒至小燒杯內(nèi),加入小量蒸餾水溶解后轉(zhuǎn)入 100m1
容量瓶中,燒杯內(nèi)的殘液用少量蒸餾水沖洗數(shù)次,沖洗液一并倒入容量瓶內(nèi),最后用蒸餾水定容至刻度,配制成標準蛋自質(zhì)溶液,其中牛血清白蛋白的濃度為 250 ug/ ml
(2) 系列標準牛血清白蛋白溶液的配制:取具塞試管 6 支,按下表加入牛血清白蛋白標準溶液及蒸餾水。然后各管加入試劑甲 5ml ,混合后在室溫下放置
10min ,再加 0.5ml 試劑乙,立即混合均勻(這一步速度要快,否則會使顯色程度減弱)。 30min 后,以不含蛋白質(zhì)的 1 號試管為對照,與其他 5
支試管內(nèi)的溶液依次用分光光度計于 5OOnm 波長下比色。記錄各試管內(nèi)溶液的吸光度。
試劑 1 2 3 4 5 6
250ug/mg 牛血清蛋白( ml ) 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0
H 2 O (ml) 1 0.8 0.6 0.4 0.2 0
蛋白質(zhì)含量( ug ) 0 50 100 150 200 250
(3) 標準曲線的繪制:以吸光度為縱標,以牛血清自蛋白含量( ug )為橫坐標,繪制標準曲線。
2 .樣品測定
(1) 稱取綠豆芽下胚軸 1g 于研缽中,加蒸餾水 2m1, 勻漿。轉(zhuǎn)入離心管,并用 6m1 蒸餾水分次洗滌研缽,并入離心管。 4000r/min 離心 20min. 棄去沉淀,上清液轉(zhuǎn)入容量瓶,定容至 10m1.
(2) 取具塞試管 2 支,各加入上清液 l ml, 分別加入試劑甲 5m1, 混勻后放置 lomin ,然后加試劑乙 0.5 ml ,迅速混勻,室溫下放置 30min ,于 500nm 波長下比色,記錄吸光值。
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