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針對(duì)工藝強(qiáng)化/集成平臺(tái)徑向流色譜法在抗體純化上的應(yīng)用

來源:廣州市艾貝泰生物科技有限公司   2022年12月01日 14:46  

Roger Alsop,1,2 Salah Ahmed ,1 Cindy Chuah ,1 and Vinit Saxena1

Sepragen Corporation , 33470 Western Ave, Union City, CA. 94587


 摘要
徑向流色譜(RFC)(Fig1)是一種經(jīng)過驗(yàn)證的快速、低壓色譜技術(shù),對(duì)蛋白質(zhì)的快速純化非常有效。RFC柱的設(shè)計(jì)使它適用于所有規(guī)模(實(shí)驗(yàn)室,中試或生產(chǎn)級(jí)別)的高通量吸附分離,另外它支持所有市場(chǎng)上的商用樹脂。RFC的設(shè)計(jì)支持穩(wěn)定的“快速”吸附分離,易于適應(yīng)全新的工藝強(qiáng)化/集成平臺(tái)。 

 

本研究采用徑向流色譜技術(shù),使用一種市售Protein A樹脂對(duì)重組人源IgG1(CHO細(xì)胞系培養(yǎng))進(jìn)行純化,通過對(duì)負(fù)載能力,流量的影響和超載條件的探索,對(duì)其數(shù)據(jù)進(jìn)行展示及可能實(shí)現(xiàn)的工藝強(qiáng)化/集成平臺(tái)進(jìn)行討論。


 

01方法

實(shí)驗(yàn)材料

1) 收獲澄清的IgG1(pH ~7, 1.3-1.5 mg/mL)

Sepragen QuantaSep系統(tǒng):

2) QuantaSep1000LX 純化設(shè)備(Fig3)

3) 商用Protein A樹脂,動(dòng)態(tài)載量~30 mg/mL

4) 2.5 cm床深(100 mL)徑向流柱(Fig2)

5) 平衡/洗滌緩沖液:25 mM Tris(pH 6-7)

6) 洗脫緩沖液:10 mM Glycine(pH 3.5)

7) 再生緩沖液:50 mM NaOH


 

02運(yùn)行

100 mL SuperFlo徑向流柱(填充載量30 mg/mL的市售Protein A)

純化平臺(tái):Sepragen QuantaSep純化系統(tǒng)(Fig3)

 

 03色譜程序與圖譜



 

 04純化篩選

實(shí)驗(yàn)從合作公司獲得的澄清IgG1開始,考察了在流量略有變化情況下的負(fù)載能力,一段時(shí)間后對(duì)收獲的樣品進(jìn)行過濾,未觀察到降解沉淀現(xiàn)象。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果見色譜圖(Fig4),數(shù)據(jù)匯總見Table 2。



 

 05對(duì)結(jié)果進(jìn)行討論并將RFC實(shí)現(xiàn)工藝強(qiáng)化/集成

為了提高生產(chǎn)力同時(shí)縮短工藝周期,工藝集成化和一體化是生物技術(shù)產(chǎn)業(yè)的趨勢(shì)。在工藝強(qiáng)化和集成系統(tǒng)中,徑向流柱(RFC)與傳統(tǒng)軸向流柱相比,可以減少生產(chǎn)周期(Table 3)

  • - 與軸向流柱推薦的(按照樹脂制造規(guī)格)300 cm/hr(75 L/hr)的流速相比,RFC支持更高的流速(150 L/hr)。即使采用更高的理論速率500cm /hr,軸向流柱也只能達(dá)到124 L /hr。

  • - RFC的設(shè)計(jì)可以降低柱壓1.,靈活的完成負(fù)載循環(huán),解決更多不穩(wěn)定樣品的負(fù)載問題。

 

徑向流柱支持多柱滑行純化系統(tǒng)在較低的壓力下以較高的流速運(yùn)行,是一個(gè)更具有成本效益的過程。此外,RFC支持任何市售樹脂,在開發(fā)的工作完成后,樹脂可快速轉(zhuǎn)移到RFC平臺(tái)2.。

將本研究中獲得的RFC流量與軸向柱理論高流量300/500 cm/hr進(jìn)行比較,徑向流柱過程更快,而更快的速度將減少操作時(shí)間。


 

 06結(jié)論

徑向流色譜法是抗體純化和工藝強(qiáng)化平臺(tái)的一個(gè)重要選擇。

它支持:

!高流速 !高回收率(防止樣品沉淀降解)大大減少純化工作時(shí)長(zhǎng)

  • 在這項(xiàng)小型抗體純化研究中,我們?cè)?/strong>22-30 cv/hr的三個(gè)高范圍內(nèi)獲得了90+%的高回收率

  • 流速明顯高于傳統(tǒng)軸向流柱

  • 支持使用任何市售樹脂

  • 低柱壓下的高流量

 

參考文獻(xiàn)

1) Comparison of Radial and Axial Flow Chromatography for Monoclonal Antibody Downstream Processing at Bench and Pilot Scales American Journal of Biochemistry and Biotechnology, 2012, 8 (4), 255-262 2) Sepragen website leaning center


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