流 式 細(xì) 胞 術(shù)：

是當(dāng)代zui/xian/jin的細(xì)胞定量分析技術(shù)之一，它是在流動(dòng)的狀態(tài)下，快速地檢測(cè)細(xì)胞或顆粒的特異性指標(biāo)，實(shí)現(xiàn)對(duì)多個(gè)檢測(cè)目標(biāo)多參數(shù)特性分析。具有特異性強(qiáng)，靈敏度高，速度快，可分析、可分選的特點(diǎn)。流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)信號(hào)分為散射光信號(hào)和熒光信號(hào)兩種。

散 射 光 信 號(hào)
散射光信號(hào)分為前向散射光和側(cè)向散射光，前者也叫小角度散射光，后者也叫90°角散射光。

前向散射光（forward scatter, FSC）是正向收集的散射光信號(hào)。一般來(lái)說(shuō)，F(xiàn)SC可以反映細(xì)胞的大小，F(xiàn)SC強(qiáng)則細(xì)胞大一些，反之則細(xì)胞小一些。但當(dāng)檢測(cè)目標(biāo)為非球形細(xì)胞（如紅細(xì)胞、精子等），由于細(xì)胞在液流系統(tǒng)中的朝向不一致，通過(guò)激光檢測(cè)時(shí)容易出現(xiàn)同型細(xì)胞FSC差別很大，這個(gè)需要特別注意。

側(cè)向散射光（side scatter, SSC）是側(cè)向收集的散射光信號(hào)。SSC對(duì)細(xì)胞膜、胞質(zhì)、核膜的折射率更為敏感，其強(qiáng)度與細(xì)胞內(nèi)部的精細(xì)結(jié)構(gòu)和顆粒性質(zhì)有關(guān)。通常，一個(gè)細(xì)胞內(nèi)部細(xì)胞器和顆粒越多，其SSC就越強(qiáng)。

利用FSC/SSC雙參數(shù)測(cè)定，可以從一些未添加熒光染料的樣本中鑒別出若干個(gè)細(xì)胞亞群。最為經(jīng)典的就是利用FSC/SSC雙參數(shù)將人外周血白細(xì)胞分為淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞和粒細(xì)胞三個(gè)亞群（如下圖），淋巴細(xì)胞FSC和SSC均較小，單核細(xì)胞FSC較大、SSC中等，粒細(xì)胞FSC和SSC均較大。

熒 光 信 號(hào)

熒光信號(hào)也分為兩種。一種是細(xì)胞自身就有的熒光在激光照射下發(fā)出的熒光信號(hào)，稱(chēng)為細(xì)胞自發(fā)熒光；另一種是人為用特異性熒光素標(biāo)記細(xì)胞，如用熒光素標(biāo)記的單克隆抗體特異性地結(jié)合胞膜、胞質(zhì)、核膜的相應(yīng)抗原，這些熒光素通過(guò)激光激發(fā)產(chǎn)生的信號(hào)。熒光信號(hào)的強(qiáng)弱反映了細(xì)胞抗原的表達(dá)含量，通過(guò)熒光信號(hào)我們可以對(duì)細(xì)胞亞群和功能進(jìn)行

熒光素的選擇一般遵循幾個(gè)原則：① 儀器需滿(mǎn)足激光管可激發(fā)相應(yīng)的熒光素且可同時(shí)檢測(cè)所需的熒光；② 染料的亮度與抗原表達(dá)量相匹配，低表達(dá)抗原，推薦使用亮熒光染料，高表達(dá)抗原，推薦使用弱熒光染料；③ 盡量選擇光譜重疊小的熒光素，光譜重疊嚴(yán)重的熒光素同時(shí)檢測(cè)會(huì)導(dǎo)致熒光溢漏，需調(diào)節(jié)補(bǔ)償；④ 盡量使用紅色激光激發(fā)自發(fā)熒光高的樣本。

流式細(xì)胞術(shù)的應(yīng)用頗為廣泛，利用兩種檢測(cè)信號(hào)可實(shí)現(xiàn)對(duì)細(xì)胞大小、顆粒度及內(nèi)部結(jié)構(gòu)（如細(xì)胞器）、細(xì)胞狀態(tài)（凋亡/周期）、細(xì)胞內(nèi)離子（Ca2+、pH、ROS）、細(xì)胞表型等的檢測(cè)分析。