流 式 細(xì) 胞 術(shù)：

是當(dāng)代zui/xian/jin的細(xì)胞定量分析技術(shù)之一，它是在流動的狀態(tài)下，快速地檢測細(xì)胞或顆粒的特異性指標(biāo)，實現(xiàn)對多個檢測目標(biāo)多參數(shù)特性分析。具有特異性強，靈敏度高，速度快，可分析、可分選的特點。流式細(xì)胞術(shù)檢測信號分為散射光信號和熒光信號兩種。

散 射 光 信 號
散射光信號分為前向散射光和側(cè)向散射光，前者也叫小角度散射光，后者也叫90°角散射光。

前向散射光（forward scatter, FSC）是正向收集的散射光信號。一般來說，F(xiàn)SC可以反映細(xì)胞的大小，F(xiàn)SC強則細(xì)胞大一些，反之則細(xì)胞小一些。但當(dāng)檢測目標(biāo)為非球形細(xì)胞（如紅細(xì)胞、精子等），由于細(xì)胞在液流系統(tǒng)中的朝向不一致，通過激光檢測時容易出現(xiàn)同型細(xì)胞FSC差別很大，這個需要特別注意。

側(cè)向散射光（side scatter, SSC）是側(cè)向收集的散射光信號。SSC對細(xì)胞膜、胞質(zhì)、核膜的折射率更為敏感，其強度與細(xì)胞內(nèi)部的精細(xì)結(jié)構(gòu)和顆粒性質(zhì)有關(guān)。通常，一個細(xì)胞內(nèi)部細(xì)胞器和顆粒越多，其SSC就越強。

利用FSC/SSC雙參數(shù)測定，可以從一些未添加熒光染料的樣本中鑒別出若干個細(xì)胞亞群。最為經(jīng)典的就是利用FSC/SSC雙參數(shù)將人外周血白細(xì)胞分為淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞和粒細(xì)胞三個亞群（如下圖），淋巴細(xì)胞FSC和SSC均較小，單核細(xì)胞FSC較大、SSC中等，粒細(xì)胞FSC和SSC均較大。

熒 光 信 號

熒光信號也分為兩種。一種是細(xì)胞自身就有的熒光在激光照射下發(fā)出的熒光信號，稱為細(xì)胞自發(fā)熒光；另一種是人為用特異性熒光素標(biāo)記細(xì)胞，如用熒光素標(biāo)記的單克隆抗體特異性地結(jié)合胞膜、胞質(zhì)、核膜的相應(yīng)抗原，這些熒光素通過激光激發(fā)產(chǎn)生的信號。熒光信號的強弱反映了細(xì)胞抗原的表達含量，通過熒光信號我們可以對細(xì)胞亞群和功能進行

熒光素的選擇一般遵循幾個原則：① 儀器需滿足激光管可激發(fā)相應(yīng)的熒光素且可同時檢測所需的熒光；② 染料的亮度與抗原表達量相匹配，低表達抗原，推薦使用亮熒光染料，高表達抗原，推薦使用弱熒光染料；③ 盡量選擇光譜重疊小的熒光素，光譜重疊嚴(yán)重的熒光素同時檢測會導(dǎo)致熒光溢漏，需調(diào)節(jié)補償；④ 盡量使用紅色激光激發(fā)自發(fā)熒光高的樣本。

流式細(xì)胞術(shù)的應(yīng)用頗為廣泛，利用兩種檢測信號可實現(xiàn)對細(xì)胞大小、顆粒度及內(nèi)部結(jié)構(gòu)（如細(xì)胞器）、細(xì)胞狀態(tài)（凋亡/周期）、細(xì)胞內(nèi)離子（Ca2+、pH、ROS）、細(xì)胞表型等的檢測分析。