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流式細胞術(shù)檢測信號及意義

來源:浙江聯(lián)碩生物科技有限公司   2022年12月14日 09:01  

術(shù):

是當代zui/xian/jin的細胞定量分析技術(shù)之一,它是在流動的狀態(tài)下,快速地檢測細胞或顆粒的特異性指標,實現(xiàn)對多個檢測目標多參數(shù)特性分析。具有特異性強,靈敏度高,速度快,可分析、可分選的特點。流式細胞術(shù)檢測信號分為散射光信號和熒光信號兩種。

 


散射光信號分為前向散射光和側(cè)向散射光,前者也叫小角度散射光,后者也叫90°角散射光。


前向散射光(forward scatter, FSC)是正向收集的散射光信號。一般來說,F(xiàn)SC可以反映細胞的大小,F(xiàn)SC強則細胞大一些,反之則細胞小一些。但當檢測目標為非球形細胞(如紅細胞、精子等),由于細胞在液流系統(tǒng)中的朝向不一致,通過激光檢測時容易出現(xiàn)同型細胞FSC差別很大,這個需要特別注意。


側(cè)向散射光(side scatter, SSC)是側(cè)向收集的散射光信號。SSC對細胞膜、胞質(zhì)、核膜的折射率更為敏感,其強度與細胞內(nèi)部的精細結(jié)構(gòu)和顆粒性質(zhì)有關。通常,一個細胞內(nèi)部細胞器和顆粒越多,其SSC就越強。

利用FSC/SSC雙參數(shù)測定,可以從一些未添加熒光染料的樣本中鑒別出若干個細胞亞群。最為經(jīng)典的就是利用FSC/SSC雙參數(shù)將人外周血白細胞分為淋巴細胞、單核細胞和粒細胞三個亞群(如下圖),淋巴細胞FSC和SSC均較小,單核細胞FSC較大、SSC中等,粒細胞FSC和SSC均較大。

 

熒光信號也分為兩種。一種是細胞自身就有的熒光在激光照射下發(fā)出的熒光信號,稱為細胞自發(fā)熒光;另一種是人為用特異性熒光素標記細胞,如用熒光素標記的單克隆抗體特異性地結(jié)合胞膜、胞質(zhì)、核膜的相應抗原,這些熒光素通過激光激發(fā)產(chǎn)生的信號。熒光信號的強弱反映了細胞抗原的表達含量,通過熒光信號我們可以對細胞亞群和功能進行

熒光素的選擇一般遵循幾個原則:① 儀器需滿足激光管可激發(fā)相應的熒光素且可同時檢測所需的熒光;② 染料的亮度與抗原表達量相匹配,低表達抗原,推薦使用亮熒光染料,高表達抗原,推薦使用弱熒光染料;③ 盡量選擇光譜重疊小的熒光素,光譜重疊嚴重的熒光素同時檢測會導致熒光溢漏,需調(diào)節(jié)補償;④ 盡量使用紅色激光激發(fā)自發(fā)熒光高的樣本。

 

流式細胞術(shù)的應用頗為廣泛,利用兩種檢測信號可實現(xiàn)對細胞大小、顆粒度及內(nèi)部結(jié)構(gòu)(如細胞器)、細胞狀態(tài)(凋亡/周期)、細胞內(nèi)離子(Ca2+、pH、ROS)、細胞表型等的檢測分析。


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