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瓊脂糖凝膠的功能應(yīng)用

來(lái)源:浙江聯(lián)碩生物科技有限公司   2022年12月21日 09:40  

一、什么是瓊脂糖凝膠

瓊脂糖凝膠是以瓊脂糖為支持介質(zhì)制備的凝膠。瓊脂糖分為一般瓊脂糖和經(jīng)化學(xué)修飾后熔點(diǎn)降低的低熔點(diǎn)瓊脂糖,瓊脂糖的熔點(diǎn)在6265°C之間,融化后在37°C下可維持液態(tài)數(shù)小時(shí),30°C時(shí)凝固成膠。多用于對(duì)染色體DNA在凝膠內(nèi)進(jìn)行原位酶切及DNA片段回收。瓊脂糖凝膠 由于孔徑大常用于大分子蛋白質(zhì)、DNA的分離。

 

二、瓊脂糖凝膠用途

瓊脂糖凝膠可以用于生化、醫(yī)學(xué)研究領(lǐng)域。在生化上可作為凝膠電泳的支持物和親和層析的載體,在醫(yī)學(xué)上還可用于研究病毒嗜菌體、細(xì)菌、臨床檢驗(yàn)、生化分析、蛋白質(zhì)、核酸、抗原、抗體,以及多糖的分離、提純及藥物的制備。

做一個(gè)wanmei的瓊脂糖凝膠圖,緩沖液的選擇很重要。

 

三、如何選擇合適的緩沖液

zuichangyong的緩沖液是TAE緩沖液和TBE緩沖液。一般來(lái)說(shuō),實(shí)驗(yàn)室通常選擇這兩者中的其中一種緩沖液,所以了解兩個(gè)緩沖液之間的區(qū)別對(duì)您的實(shí)驗(yàn)是非常重要的,那么如何區(qū)分這兩個(gè)緩沖液呢:

1.TAE是Tris-乙酸,緩沖容量小,但是溶解度大,易于儲(chǔ)存;TBE是Tris-硼酸,緩沖容量大,但是溶解度小,不易長(zhǎng)期儲(chǔ)存,易產(chǎn)生沉淀。

2.TAE適合較大的DNA片段,而TBE適合較小的DNA片段。

3.如果凝膠運(yùn)行時(shí)間長(zhǎng),建議使用TBE。如果您計(jì)劃將DNA用于任何下游應(yīng)用,則建議您使用TBE。

4.TAE易于儲(chǔ)存,更加穩(wěn)定,而TBE幾周內(nèi)會(huì)出現(xiàn)沉淀。

 

四、新鮮的緩沖液

選擇好緩沖液后,準(zhǔn)備一份從未使用過(guò)的緩沖,新鮮的小份緩沖液,可以儲(chǔ)存5倍或10倍的緩沖液等,但使用前一定要稀釋。使用新鮮的緩沖液,用于制備凝膠.實(shí)驗(yàn)結(jié)果會(huì)變得更清晰,條帶更均勻。

 

五、緩沖液的溫度把控

正所謂慢工出細(xì)活,制作活瓊脂糖凝膠一定要有耐心。凝膠運(yùn)行電泳電壓應(yīng)在75V以下,緩沖液不要過(guò)熱。緩沖液的溫度是是造成條帶不清晰、不均勻的主要原因之一。為了防止緩沖液出現(xiàn)過(guò)熱的情況,在運(yùn)行前,可以將緩沖液或凝膠冷卻,或在冷藏室運(yùn)行凝膠。


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