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使用緩沖液注意這些問題
1) 緩沖液使用前必須過濾。
2) 溶劑、樣品易受到細菌和霉菌的影響，要注意清潔。
3)一般不能直接用有機溶劑做清洗沖洗。
4)梯度洗脫時，選低吸收值的緩沖液 ：
例如：梯度洗脫時，緩沖液與有機相應預混，以防止析鹽。在保證峰不拖尾的情況下，盡可能選用低濃度的緩沖鹽，防止析鹽; 緩沖鹽濃度，一般用20～30mM基本上就可以了，如果流動相中有機相含量高的話，流動相中的鹽類緩沖液濃度就不能過高，鹽的濃度起碼要保證在流動相條件下不會析出。離子對緩沖液濃度要高一點，一般50～100mM。
緩沖液大量稀釋后pH變化在什么范圍內(nèi)？
緩沖液大量稀釋后pH只是比原來的溶液有很少的變化。因為稀釋之后，會促進緩沖溶液加速水解，其ph值會因此得到補償，而不會發(fā)生劇烈的變化。
由弱酸及其鹽、弱堿及其鹽組成的混合溶液，能在一定程度上抵消、減輕外加強酸或強堿對溶液酸堿度的影響，從而保持溶液的pH值相對穩(wěn)定。這種溶液稱為緩沖溶液。緩沖體系由：
1、弱酸和它的鹽（如HAc---NaAc）
2、弱堿和它的鹽（NH3·H2O---NH4Cl）
3、多元弱酸的酸式鹽及其對應的次級鹽（如NaH2PO4---Na2HPO4）的水溶液組成。
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