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奶粉中維生素B12試劑盒檢測方法及注意事項

來源:北京中檢維康生物技術(shù)有限公司   2023年01月06日 09:16  

簡介:

維生素B12又叫鈷胺素,是維一含金屬元素的維生素。自然界中的維生素B12都是微生物合成的,高等動植物不能制造維生素B12。維生素B12是維一的一種需要一種腸道分泌物(內(nèi)源因子)幫助才能被吸收的維生素。有的人由于腸胃異常,缺乏這種內(nèi)源因子,即使膳食中來源充足也會患惡性貧血。植物性食物中基本上沒有維生素B12。它在腸道內(nèi)停留時間長,大約需要三小時(大多數(shù)水溶性維生素只需要幾秒鐘)才能被吸收。維生素B12的主要生理功能是參與制造骨髓紅細(xì)胞,防止惡性貧血;防止大腦神經(jīng)受到破壞。

原理:

CLOVER VB12試劑盒的測定是基于免疫學(xué)中抗原抗體特異性反應(yīng)的原理而建立的。微孔板包被有VB12抗原。加入VB12抗體和VB12標(biāo)準(zhǔn)品或樣品提取液。標(biāo)準(zhǔn)品或樣品中提取的VB12能與酶標(biāo)板上的VB12包被原競爭性地結(jié)合定量的抗體,沒有結(jié)合的抗體、標(biāo)準(zhǔn)品或樣品中提取的VB12在洗滌步驟中被除去。再加入酶標(biāo)二抗與微孔中的VB12抗體反應(yīng)。洗滌除去沒有反應(yīng)的酶標(biāo)二抗。加入底物溶液溫育,酶標(biāo)記物將無色的顯色劑轉(zhuǎn)化為藍(lán)色的產(chǎn)物,加入終止液后顏色由藍(lán)色轉(zhuǎn)變?yōu)辄S色,在450nm 處測量每孔的OD值。OD值與樣品中的維生素B12含量成反比。

 

奶粉前處理:

1)         稱取1.0g奶粉樣品于50mL離心管中,加入9mL 50℃純凈水溶解,即位復(fù)原乳樣品。

2)         1mL復(fù)原乳樣品到1mL離心管中,4 3000r/min離心10分鐘。

3)         去除上層脂肪層,轉(zhuǎn)移出100μL中層奶液至一潔凈的離心管中,加入稀釋緩沖液500μL,渦旋混勻待檢(1 份上層液+5份稀釋液)。

4)         50μL 進(jìn)行分析。

試劑盒操作:

1)         取所需量的微孔板條裝在酶標(biāo)板框架上。

2)         分別吸取50μL標(biāo)準(zhǔn)品和樣品加至相應(yīng)的微孔(雙孔)中,再各加入50μL的抗體,加蓋,室溫(25℃)溫育30分鐘。

3)         倒出孔中的液體,每孔加入250μL稀釋好的洗滌液洗滌,重復(fù)操作四次。

4)         每孔加入酶標(biāo)二抗100μL, 室溫(25℃)溫育30分鐘。

5)         重復(fù)步驟3,反復(fù)洗滌四次。

6)         每孔加入100μL顯色底物,室溫避光溫育10分鐘。

7)         每孔加入50μL終止液,混勻。

置于酶標(biāo)儀中,振蕩混勻,在450nm處測定吸光度值(OD值),參比波長630nm。(iELisa全自動酶標(biāo)儀可以直接讀出、打印濃度值)

 

注意事項

1)         室溫低于20或試劑及樣品未回到室溫(20- 25)會導(dǎo)致數(shù)值偏低。

2)         在洗板過程中如果出現(xiàn)板孔干燥過久的情況,則會出現(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)曲線不成線性,重復(fù)性不好的現(xiàn)象。所以洗板拍干后應(yīng)立即進(jìn)行下一步操作。

3)         標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)和顯色液對光敏感,避免直接暴露在光線下。

4)         混合要均勻,洗板要徹低(包括加樣品和標(biāo)準(zhǔn)液的時候都必需充分混合均勻)。

5)         終止液為強(qiáng)酸性物質(zhì),避免接觸皮膚。

6)         不要使用過了有效期的試劑盒,也不要使用不同批次的試劑盒,這樣會引起測定誤差。


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