使用前標(biāo)本準(zhǔn)備:
冰凍切片標(biāo)本可采用 (1) 新鮮組織,特點(diǎn)是快速,但未用完的包埋組織塊不能保存;(2) 使用經(jīng)典方法10%甲醛或4%多聚甲醛室溫2~10分鐘固定過(guò)的組織,優(yōu)點(diǎn)是既不影響后續(xù)步驟,包埋組織塊又可長(zhǎng)期冰凍保存,隨時(shí)再用,缺點(diǎn)是步驟稍繁。(3) 培養(yǎng)細(xì)胞,800g離心10分鐘收集培養(yǎng)細(xì)胞,用吸頭或針頭撥出細(xì)胞沉淀塊,放入OCT包埋劑內(nèi)。
應(yīng)避免采用降低組織冰點(diǎn)的甲醇乙醇固定。本產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)不提供關(guān)于組織取材、滲透、固定、冰凍切片等技術(shù)信息。用戶(hù)應(yīng)閱讀冰凍切片機(jī)操作手冊(cè),參考各種常規(guī)技術(shù)方法。
使用方法:
1. OCT包埋:用水或PBS沖洗固定的組織塊,用吸水紙吸去液體。在盛標(biāo)本的包埋模子內(nèi),擠出適量的包埋劑,放入組織和細(xì)胞沉淀塊,加包埋劑wanquan埋沒(méi)組織塊。可用2層鋁箔紙折疊成簡(jiǎn)易的模子。如有氣泡可用針頭或吸頭吸出。
2. 冰凍:將盛有組織細(xì)胞和包埋劑的模子,正置于切片機(jī)冷室內(nèi)冰凍10分鐘。此時(shí),包埋劑為乳白色固體。包埋劑和組織冷凍時(shí)體積略有膨脹,因此模子應(yīng)正置,由底部向頂部進(jìn)行冰凍。也可將OCT包埋的組織置于干冰或液氮,或放入-40~-70 ºC冰箱冰凍固化保存,用前取出置于切片機(jī)冷室內(nèi)平衡溫度(否則損壞刀)。
3.切片:可在切片機(jī)的組織卡盤(pán)(chuck)上加少許包埋劑并在其固化前嵌入組織塊,然后再于組織周?chē)尤肷僭S包埋劑使其穩(wěn)定。進(jìn)行常規(guī)切片,厚度范圍2~100 µm。
4. 收片后,用適量水或PBS沖洗切片3次,每次2−3分鐘,洗除包埋劑。而后可進(jìn)行常規(guī)組化染色、病理染色、原位雜交。未用完的組織塊可冷凍儲(chǔ)存。
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