對于自然界中的生物發(fā)光現(xiàn)象，大家應(yīng)該都是比較熟悉的，其廣泛存在于海洋生物、微生物和陸生生物中。生物發(fā)光現(xiàn)象其實是在生物體內(nèi)由于生命過程中由化學(xué)反應(yīng)介導(dǎo)的將化學(xué)能轉(zhuǎn)化為光能所產(chǎn)生的，這其中起到主要作用的是一種叫熒光素酶的物質(zhì)。熒光素酶是自然界中能夠產(chǎn)生生物熒光的酶的統(tǒng)稱，具代表性的是螢火蟲熒光素酶和海腎熒光素酶，被廣泛應(yīng)用到生物學(xué)的報告基因中—一類可以編碼熒光蛋白或酶，從而將看不見的底物轉(zhuǎn)化為發(fā)光或彩色產(chǎn)物的一類基因報告系統(tǒng)，光信號可通過發(fā)光檢測儀或CCD相機進(jìn)行檢測，是生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域基礎(chǔ)研究的一個重要工具，廣泛應(yīng)用于檢測細(xì)胞的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)和基因表達(dá)。

原理解析

螢火蟲熒光素酶和海腎熒光素酶雖然同屬于熒光素酶，但是它們的來源及發(fā)光原理、發(fā)光顏色、檢測波長等都不盡相同。

表1 兩種熒光素酶作用原理的區(qū)別

螢火蟲熒光素酶發(fā)光原理：

海腎熒光素酶發(fā)光原理：
 

利用熒光素酶與底物結(jié)合發(fā)生化學(xué)發(fā)光反應(yīng)的特性，可以把感興趣的基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)控元件克隆在熒光素酶基因的上/下游，構(gòu)建成熒光素酶報告質(zhì)粒。然后轉(zhuǎn)染細(xì)胞，經(jīng)適當(dāng)刺激或處理后裂解細(xì)胞，測定熒光素酶活性。通過熒光素酶活性的高低判斷刺激前后或不同刺激對感興趣的調(diào)控元件的影響。
 
圖2 熒光素酶報告基因檢測流程圖

由于螢火蟲熒光素酶和海腎熒光素酶的底物和發(fā)光顏色不同，并且易于定量，檢測靈敏度高，所以在雙報告基因?qū)嶒炛械玫綇V泛應(yīng)用。在雙熒光素酶報告基因檢測系統(tǒng)中螢火蟲熒光素酶一般是作為主報告基因， 海腎熒光素酶通常作為內(nèi)參報告基因，來標(biāo)定檢測用報告基因的測量結(jié)果，從而達(dá)到有效地減少實驗誤差的目的。

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愛必信雙螢光素酶報告基因檢測試劑盒為檢測基因的表達(dá)量提供有效的手段，在 DLR檢測中，螢火蟲螢光素酶（Firefly luciferase）和海腎螢光素酶（Renilla luciferase）的活性可在單個樣品中依次檢測。先以螢光素（Luciferin）為底物來檢測螢火蟲螢光素酶的活性，然后加入抑制螢火蟲螢光素酶催化的物質(zhì)，同時加入腔腸素（Coelenterazine）檢測海腎螢光素酶的活性，實現(xiàn)雙螢光素酶報告基因檢測。

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兼容性好：本試劑盒的光信號可以兼容化學(xué)發(fā)光儀、酶標(biāo)儀或液閃測定儀進(jìn)行測定。
準(zhǔn)確性高：系統(tǒng)包含海腎熒光素，可校正孔間細(xì)胞數(shù)量、轉(zhuǎn)染效率、以及細(xì)胞生長狀態(tài)造成的誤差，保證檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性。
抗干擾性強：無細(xì)胞內(nèi)源活性干擾。

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