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艾柏森生物兔子單克隆抗體制備

來源:安諾倫(北京)生物科技有限公司   2023年01月10日 10:31  

艾柏森生物兔子單克隆抗體制備

限于技術(shù)保護的原因,目前,兔單克隆雜交瘤細胞制備技術(shù)被一家公司壟斷,所以我們無法通過像類似制備小鼠單克隆抗體那樣,制備兔源雜交瘤細胞獲得兔源單克隆抗體。為此,公司在一大批免疫學(xué)與基因工程學(xué)專家的幫助下,先后建立了兩套兔源單克隆抗體制備方案。這兩種方案均不依賴于兔源骨髓瘤細胞,但是其抗體的種源特性毫無疑問是兔源,在保留兔源單克隆抗體優(yōu)勢的同時,大大壓縮試驗周期,提高試驗成功率。

 

 

方案一噬菌體展示技術(shù)

M13單鏈絲狀噬菌體展示系統(tǒng)是目前應(yīng)用廣泛的文庫展示系統(tǒng),通過將蛋白、抗體或多肽與噬菌體pIII蛋白融合表達,使之參與噬菌體組裝,并展示在噬菌體表面,形成噬菌體展示文庫。使用噬菌體展示文庫,針對特定靶分子進行3-5 輪親和篩選,可以富集能特異性結(jié)合靶分子的噬菌體,得到相應(yīng)的DNA序列信息。

艾柏森(北京)生物科技有限公司目前開發(fā)的噬菌體展示技術(shù)服務(wù)平臺涵蓋了免疫抗體庫、天然抗體庫等常用的文庫類型,可根據(jù)客戶的特殊需求定制個性化文庫,并提供靈活高效的篩選服務(wù)。在此技術(shù)儲備的基礎(chǔ)上,我們提供的兔源單克隆抗體噬菌體展示方案,可高效靈活的根據(jù)客戶需要大規(guī)模探測高親和力抗體,同時結(jié)合公司的兔源Fc表達質(zhì)粒,與高效真核表達系統(tǒng),使得我們的抗體擁有高的表達效率。

方案二重組抗體制備技術(shù)

艾柏森(北京)生物科技開發(fā)出一種革命性的單克隆抗體生產(chǎn)技術(shù),使單克隆抗體的生產(chǎn)不害動物,不依賴雜交瘤。該技術(shù)通過分離培養(yǎng)B細胞,并利用ELISA、Western Blot、IHC(Immunohistochemistry)等方法篩選出抗原特異性B細胞。再通過分子克隆的手段重組表達完整的抗體分子。該技術(shù)可用于開發(fā)高品質(zhì)的兔子和小鼠等不同物種的單克隆抗體。

其主要依托技術(shù)有:

高效的B細胞體外培養(yǎng)體系

高通量B細胞篩選技術(shù)

穩(wěn)定的VH和VL抗體分子表達體系

高通量的抗體分子測序平臺

請慎重考慮周期事宜,以上時間僅為理想條件下最短周期;

為了縮短試驗周期建議考慮自行提供抗原直接免疫做起;

免疫環(huán)節(jié)設(shè)立第一個驗收節(jié)點,效價合格,取脾臟,效價不合格,終止實驗;

抗體庫構(gòu)建步驟啟動之前,至少支付此步驟的50%全款;完成項目,支付尾款。

服務(wù)組合:

客戶:提供抗原蛋白信息

制備流程:

1)抗原制備\質(zhì)粒表達蛋白純化\多肽設(shè)計合成及交聯(lián);

2)免疫:免疫兔子2只,失敗后又加免3只;

3)ELISA/Western-blot試驗監(jiān)控兔子血清中的抗體效價和特異性,根據(jù)ELISA和WB檢測,篩選兔子;

4)cDNA文庫制備與噬菌體載體構(gòu)建;

5)磁珠鏈霉素親和篩選;

6)陽性克隆測序與基因合成橋接;

7)真核表達質(zhì)粒構(gòu)建;

8)穩(wěn)轉(zhuǎn)細胞構(gòu)建;

9)試表達鑒定與結(jié)果交付;

交付產(chǎn)品(每種抗原,所有兔子總共的)

1)1株針對免疫原特異性的單克隆雜交瘤細胞株

2)1ml(濃度約0.1~1mg/ml)純化的抗體,Elisa效價應(yīng)至少1:200以上;

制備時間:3~6個月

成功案例:

Publication: Plos One

IF:3.05

Title:TSC1/2 signaling complex is essential for peripheral naïve CD8+ T   cell survival and homeostasis in mice.

Name:anti- Tuberin antibody

Species: Mouse

Type:Rabbit Recombination Monoclonal antibody

 

 

 

Immunohistochemical analysis ofparaffin-embedded mouse placenta tissue using anti-Tuberin antibody. Counterstained with hematoxylin.

Recommended constration: 1:200

 

 

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