硝酸纖維素膜(nitrocellulose filter membrane，簡(jiǎn)稱NC膜)，在膠體金試紙中用做C/T線的承載體，同時(shí)也是免疫反應(yīng)的發(fā)生處。

蛋白質(zhì)吸附的重要性
在免疫層析檢測(cè)中，蛋白質(zhì)固著于NC膜作為待測(cè)樣本的捕獲試劑。由于檢測(cè)結(jié)果取決于捕獲試劑在膜上達(dá)到良好的吸附效果，因此蛋白質(zhì)在膜上均一、良好的吸附對(duì)檢測(cè)結(jié)果非常重要。

自從NC膜第一次應(yīng)用于蛋白質(zhì)吸附以來，已有相當(dāng)多的關(guān)于蛋白質(zhì)吸附于NC膜的研究，但蛋白質(zhì)吸附于NC膜的確切作用機(jī)理仍然不能確定。雖然多種作用力在結(jié)合中起到作用，尤其比如疏水力、氫鍵、靜電作用，但是每種作用力的重要性和明確的效果仍然讓人難以琢磨。目前有兩種比較合理的作用模式。第一種模式認(rèn)為，蛋白質(zhì)最初通過靜電作用被吸附到NC膜表面，而長(zhǎng)期的結(jié)合作用是通過氫鍵和疏水作用完成的。雖然這一原理難以證明，但與已發(fā)表的文獻(xiàn)實(shí)驗(yàn)結(jié)論一致，也是尤為接受的作用機(jī)理。

第二種模式認(rèn)為，蛋白質(zhì)首先通過疏水相互作用結(jié)合到NC膜上，通過靜電力牢固地與NC膜結(jié)合則。該結(jié)合模式同大量已發(fā)表的文獻(xiàn)結(jié)果一致，然而靜電作用機(jī)理對(duì)于采用干燥或乙醇吸附方法到達(dá)的蛋白質(zhì)長(zhǎng)期穩(wěn)定的吸附于NC膜上無法提高合理的解釋。

不管蛋白質(zhì)結(jié)合的作用力如何達(dá)到平衡，研究人員在優(yōu)化蛋白質(zhì)吸附于特定的NC膜時(shí)，必須綜合考慮所有影響蛋白質(zhì)吸附的作用力。這一觀點(diǎn)不可避免的影響著試紙條板材的選擇及其處理工藝。例如，如果產(chǎn)品開發(fā)人員選用可以極度降低靜電相互作用或者疏水相互作用的緩沖液，那么蛋白質(zhì)的吸附能力則劇烈的降低。同理，蛋白質(zhì)點(diǎn)膜后充足地干燥對(duì)于確保蛋白質(zhì)長(zhǎng)期穩(wěn)定地固著于NC膜非常重要。

生產(chǎn)商選用的材料能夠有效地將蛋白吸附于NC膜上。影響蛋白質(zhì)吸附于NC膜的材料通常有3種類型：非特異性的蛋白質(zhì)、影響靜電相互作用以及疏水相互作用的物質(zhì)。常見的能夠降低蛋白質(zhì)結(jié)合的物質(zhì)包括競(jìng)爭(zhēng)蛋白質(zhì)結(jié)合位點(diǎn)的其他蛋白，如BSA、動(dòng)物血清，干擾氫鍵的形成物質(zhì)（如甲酰胺、尿素），影響疏水作用形成的物質(zhì)（如Tween、Triton、Brij）。人工合成的結(jié)合物比如聚乙/烯醇、聚乙二醇以及聚乙/烯吡/咯烷酮也可以影響蛋白質(zhì)的結(jié)合，它們的作用機(jī)理可能是抑制一個(gè)或者多個(gè)蛋白質(zhì)與NC膜結(jié)合的共同作用的結(jié)果。

如果NC膜上結(jié)合的蛋白量不足或者蛋白結(jié)合力不夠強(qiáng)，就會(huì)出現(xiàn)相當(dāng)多的問題，在檢測(cè)結(jié)果的檢測(cè)線上非常明顯（。如果膜上結(jié)合的蛋白量太低，那么在結(jié)果中檢測(cè)線顯色較弱而且檢測(cè)靈敏度降低。如果蛋白不能牢固的吸附于NC膜，那么在蛋白吸附于NC膜以前發(fā)生擴(kuò)散，從而導(dǎo)致檢測(cè)線較寬、顯色較弱而不是鮮艷而清晰，使檢測(cè)結(jié)果難以解釋。在條件下，如果蛋白與NC膜的物理吸附作用太弱，流過的蛋白檢測(cè)物和表面活性劑溶液可能將固著的蛋白從NC膜上洗掉，從而顯示較寬或者根本不清晰的檢測(cè)線，難以解釋檢測(cè)結(jié)果。

體外診斷試劑研發(fā)人員經(jīng)常遇到上述問題，而且這些問題明顯地延長(zhǎng)了免疫層析檢測(cè)試劑的研發(fā)周期。為了了解如何解決上述問題，研究人員首先應(yīng)該牢固的掌握影響蛋白與NC膜結(jié)合的各種因素，包括材料的固有屬性及其檢測(cè)前的處理過程。

影響蛋白質(zhì)吸附的因素
當(dāng)研究蛋白質(zhì)捕獲劑結(jié)合于NC膜時(shí)，研發(fā)人員應(yīng)該考慮下面五個(gè)影響蛋白質(zhì)結(jié)合作用機(jī)理的每一個(gè)關(guān)鍵因素。
Ø 溶解捕獲蛋白的工作緩沖液；
Ø 用來固著捕獲蛋白的NC膜；
Ø 捕獲蛋白自身；
Ø 將捕獲蛋白點(diǎn)樣于NC膜的系統(tǒng)；
Ø 捕獲蛋白點(diǎn)樣時(shí)的環(huán)境濕度。