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高效液相色譜中溶劑與檢測器的兼容性

來源:月旭科技(上海)股份有限公司   2023年01月12日 09:42  

在高效液相色譜中,溶劑是指用于制備流動相、溶解和輸送樣品的溶液。流動相是影響HPLC的性能的主要因素,它的性質(zhì)必須滿足HPLC測試的嚴(yán)格要求。在選擇溶解樣品的溶劑和其他與制備樣品有關(guān)的溶劑時,同樣也需考慮這些溶劑的性質(zhì)與檢測器的兼容性。



01

UV檢測器


在樣品的檢測波長下,所選流動相的吸光度最好是A<0.2AU,特別是在梯度洗脫中,較低的吸光度意味著能獲得更好的檢測精度和更好的結(jié)果。但是,在等度洗脫中吸光度稍高的溶劑也是可以接受的。選用紫外檢測波長低于200nm的溶劑是很罕見的,除非是用于檢測那些在高于200nm波長處吸光度低的物質(zhì)。

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因?yàn)樗诖笥诘扔?00nm波長都無紫外吸收,所以含水流動相的吸光度,等于純?nèi)軇┑奈舛瘸艘粤鲃酉郆溶劑的體積分?jǐn)?shù)φ。例如,在215nm波長,當(dāng)B為以下各種不同溶劑時,含有25%B溶劑的流動相的吸收值A(chǔ)分別對應(yīng):乙腈,0.00AU;甲醇,0.09AU;脫氣甲醇,0.05AU;四氫呋喃,0.22AU;異丙醇,0.07AU。注意,脫氣甲醇降低了氧氣在純?nèi)軇┲械臐舛?,?dǎo)致在200~240nm波長下,吸光度降低了接近1/3。當(dāng)用充氦氣的方法進(jìn)行流動相脫氣后,由于溶劑中氧氣含量的比例下降,流動相中的B溶劑吸光值也會降低。氧氣在低極性溶劑(如四氫呋喃和異丙醇)中溶解度更高,因此,在實(shí)踐當(dāng)中,低極性溶劑的吸光值可能會比理論值更高。(理論值見<液相色譜方法開發(fā)中紫外吸收波長的選擇>)

水在波長≥200nm時無吸收,這是假定水是經(jīng)過嚴(yán)格純化的。HPLC級水在ASTM D1193中有詳細(xì)說明。在低波長中檢測,有時不但會要求水中的總有機(jī)碳(TOC)低于50ppb,而且要有足夠高的電阻率。

02

RI檢測器


在等度洗脫中,流動相的選擇通常不受RI檢測器的限制??赏ㄟ^選擇折光率跟樣品成分折光率有較大差異的流動相,從而提高檢測靈敏度。基于差分測量的檢測器(如:RI)不能用于梯度洗脫。因?yàn)橥ǔG闆r下A、B溶劑之間的響應(yīng)值相差很大。

03

MS檢測器


流動相在MS接口蒸發(fā),流動相一般由水、有機(jī)溶劑組成,揮發(fā)性添加劑的使用也很常見(添加劑不能是非揮發(fā)性緩沖劑或鹽)。因?yàn)橐呀?jīng)去除流動相,所以在LC-MS中并不存在流動相的紫外吸收,但是溶劑中不能有顆粒存在。


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