感覺態(tài)細(xì)胞的儲存和制備注意事項

來源：上海一研生物科技有限公司 2023年01月17日 10:02

　　感覺態(tài)細(xì)胞的儲存：

　　每次轉(zhuǎn)化時使用新鮮的細(xì)胞是明智的，因為長時間儲存，轉(zhuǎn)化效率會降低，但這并不總是可行的。

　　感受態(tài)細(xì)胞可以存儲在-80°C長達(dá)一年，沒有轉(zhuǎn)化潛能的損失。然而，瞬間凍結(jié)在液氮或-80°C冰箱是不建議的。需要在冷凍保護(hù)劑中，像哺乳動物細(xì)胞一樣緩慢地冷凍。

　　使用硬紙板或聚苯乙烯泡沫塑料盒等儲存。

　　用紙片等將盒子里的細(xì)胞管隔開，分成多個小格子。

　　復(fù)蘇過程中，在37°C解凍細(xì)胞，轉(zhuǎn)化前用豐富培養(yǎng)基清洗防凍劑。

　　感覺態(tài)細(xì)胞的制備注意事項：

　　1、配制溶液的水受有機(jī)污染，會降低感受態(tài)的轉(zhuǎn)化率；

　　2、液氮速凍可以提高轉(zhuǎn)化效率約5倍；

　　3、甘油會使細(xì)菌沉淀附著力降低；

　　4、感受態(tài)細(xì)胞是很脆弱的，實(shí)驗操作過程中，動作要輕；

　　5、制備感受態(tài)，所用的試劑及器具的潔凈程度要求高；操作要求嚴(yán)格；轉(zhuǎn)化效率高；

　　6、為達(dá)到高轉(zhuǎn)化效率，活細(xì)胞數(shù)需少于108個細(xì)胞/ml；

　　7、不同菌株之間，OD600的數(shù)值與每毫升中活細(xì)胞數(shù)間的關(guān)系很大；

　　8、在大腸桿菌生長曲線上，在生長初期和末期兩個時期獲得較高轉(zhuǎn)化率；

　　9、有實(shí)驗曾表明，可以在4℃在氯化鈣溶液中保存24-48h，在起初保存的12-24h內(nèi)，轉(zhuǎn)化效率會有所提高，然后降低到初始水平；

　　10、對于克隆用途來說，每份細(xì)胞體積有50μl足矣；

　　11、玻璃管會降低轉(zhuǎn)化率約10倍。

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