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高壓蒸汽滅菌是利用高壓和高熱釋放的潛熱進行滅菌。原理是在密閉的容器中，水的沸點因為蒸汽壓力增大而升高，以此提高蒸汽的溫度，用來進行有效滅菌。
對于滅菌器的效果驗證，目前并沒有相關標準嚴格的要求驗證的頻次，但是實驗室應當自行制定驗證頻次規(guī)定，并嚴格按照要求進行。
一、化學指示劑法
原理：
化學指示劑在一定溫度與作用時間下，會受熱變色或變形，根據這一特點來判斷是否達到需要的滅菌參數。
一般實驗室常用的是3M壓力滅菌指示膠帶，這種指示膠帶是利用滅菌前后膠帶顏色變化來判斷滅菌效果。
它是由熱敏化學物質與顯色劑及漆輔料制成油墨，并將油墨以條紋狀印制在特制的一面膠紙帶制成。指示膠帶可以直接粘貼于包裹外，長度不低于5cm，并輕壓膠帶以增加粘性和封包效果；在121℃持續(xù)20min或130℃持續(xù)4min后，膠帶上印有的斜行的白色指示線條會變黑，成為黑色線條；如變色不均勻，可認為該包裹不符合滅菌條件。
二、留點溫度計法
原理：
留點溫度計法是利用水銀溫度計不回流的特性，其原理跟傳統(tǒng)體溫計相似，可以指示滅菌器在滅菌過程中達到的最高溫度。
驗證時把水銀溫度計放在盛水的大三角瓶里，滅菌時把三角瓶放在滅菌器的上部和下部，滅菌結束后看水銀溫度計的溫度和要求溫度是否一致。此法只能驗證溫度，不能指示滅菌時間是否達到要求，因此是滅菌器驗證的至低標準。
三、自制測溫管法
原理：
利用一些化學藥品受熱熔化后再冷卻，晶體的外形不同的特性，把化學藥品密封在小玻璃管內，滅菌時放在滅菌器里，滅菌完后觀察晶體的形狀，就可以判斷溫度是否達標。
四、生物指示劑法
原理：
利用非致病性的嗜熱脂肪桿菌的芽孢作為指示菌，來測定熱力滅菌的效果。嗜熱脂肪桿菌的芽孢對熱的抗性較強，其耐熱能力與病原微生物肉毒梭菌芽孢相似，以此為指示菌，驗證滅菌器能否達到滅菌要求。
生物指示劑分為三種：芽孢懸液、芽胞菌片、菌片和培養(yǎng)基混合指示管。一般放在滅菌容器的5個點：下層的前、中、后和上層、中層的中央點。滅菌后取指示劑接種到溴甲酚紫-葡萄糖蛋白胨水中，55-60℃培養(yǎng)2-7天，若培養(yǎng)基澄清、顏色沒有變化即說明芽孢被殺死，滅菌器滅菌效果良好；如果培養(yǎng)基黃色渾濁，說明芽孢未被殺滅，滅菌器滅菌效果不合格。芽孢懸液和芽孢菌片的驗證方法均是如此。
目前實驗室還常用商品化的生物指示管，其原理與芽孢懸液和芽胞菌片相同，指示管中有嗜熱脂肪芽孢桿菌芽孢和培養(yǎng)液玻璃小管，將指示管放在滅菌容器內的各個點上，高壓滅菌后，將管中盛培養(yǎng)液的玻璃管擠碎，培養(yǎng)液從內部的小管中被放出，放入56℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，同時做陽性對照。若是滅菌器滅菌效果不合格，指示管內的芽孢復活后生長會改變肉湯的顏色是肉湯變?yōu)辄S色；若是滅菌器滅菌效果良好則管內芽孢被滅活不再生長，肉湯仍舊是原來的紫色。
常用的試劑是苯甲酸，苯甲酸的熔點為121-123℃，跟我們要求的滅菌器的滅菌溫度基本吻合，因此滅菌時把固體苯甲酸密封在小玻璃管內放進滅菌器，滅菌結束就可以觀察苯甲酸的狀態(tài)來驗證滅菌器是否達到了要求溫度。這種方法的局限跟留點溫度計法相同，也只能指示滅菌時的溫度，對滅菌時間是否達到要求無法判斷。
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