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Cygnus Vero細(xì)胞HCP ELISA檢測(cè)試劑盒的檢測(cè)原理
CygnusVeroCellHCPELISAKitVero細(xì)胞HCP試劑盒檢測(cè)原理：
VeroCell檢測(cè)是一個(gè)雙位點(diǎn)酶聯(lián)免疫檢測(cè)。樣本中包含的VeroCellHCPs蛋白與標(biāo)記有抗-VeroCell抗體的辣根過(guò)氧化物酶同時(shí)反應(yīng)，反應(yīng)發(fā)生在之前涂有一層吸附性抗-VeroCell蛋白抗體的微量滴定板中進(jìn)行。免疫反構(gòu)成為夾層式結(jié)構(gòu)：固相抗休-HCP-酶標(biāo)記抗體。反應(yīng)結(jié)束后清洗微量滴定板去除未結(jié)合反應(yīng)物。添加TMB作用底物反應(yīng)。微量滴定板讀數(shù)器上測(cè)定水解物濃度，水解物濃度與VeroCellHCPs蛋白濃度成比例。用提供的標(biāo)準(zhǔn)液繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，根據(jù)讀數(shù)可以計(jì)算出VeroCellHCPs蛋白含量。
檢測(cè)過(guò)程：
取出所有試劑平衡到室溫→分別移取50µl標(biāo)準(zhǔn)液，對(duì)照物和樣品至待測(cè)孔→移取100µlanti-VeroCell:HRP（#F501）至每孔→密封滴定板，搖床室溫溫育2小時(shí)，180rpm→清空小孔，用紙吸干殘留液，350µl清洗緩沖液清洗4次→加100µlTMB作用物（#F005）→室溫靜置30分鐘，不需搖床→加100µl反應(yīng)終止液（#F006）→分光光度計(jì)450/650nm讀數(shù)
結(jié)果分析：
標(biāo)準(zhǔn)液（0,2,8,25,75,200ng/mL）可用于制作標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，標(biāo)準(zhǔn)液濃度相當(dāng)于免疫反應(yīng)HCP總濃度。根據(jù)測(cè)定的小孔中標(biāo)準(zhǔn)液吸光值繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。數(shù)據(jù)分析可以使用計(jì)算機(jī)選配曲線(xiàn)，例如點(diǎn)到點(diǎn)，三次樣本函數(shù)，或四參數(shù)邏輯曲線(xiàn)。不要使用線(xiàn)性回歸分析修改樣品吸光值，這樣會(huì)出現(xiàn)顯著誤差。也可以手工繪圖，Y軸標(biāo)注吸光值，X軸標(biāo)注濃度。然后根據(jù)樣品吸光值計(jì)算出樣品中HCP濃度。（操作時(shí)每一濃度標(biāo)準(zhǔn)液都要滴定到兩個(gè)小孔中，以便計(jì)算平均分光光度值，樣品也需計(jì)算平均吸光值）。
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