中性蛋白酶由枯草芽胞杄菌經(jīng)液體深層發(fā)酵培養(yǎng)并提煉精制而成的固體酶制劑?？捎糜诟鞣N蛋白質(zhì)水解處理。在中性條件下,本品能將大分子蛋白質(zhì)水解為氨基酸等產(chǎn)物。

【適用范圍】可廣泛應(yīng)用于動(dòng)植物蛋白的水解,制取生產(chǎn)高級(jí)調(diào)味品和食品營(yíng)養(yǎng)強(qiáng)化劑的HAP和HP,以及皮革脫毛、軟化、羊毛絲綢脫膠等加工。適用pH范圍是6.0-80,最適PH值70,濕度范圍是10c60℃最適溫度50℃

【動(dòng)植物蛋白水解粉應(yīng)用】廣泛用于生產(chǎn)高級(jí)調(diào)味品和食品營(yíng)養(yǎng)強(qiáng)化劑,各種動(dòng)物來(lái)源性抽提物生產(chǎn)功能性骨、肉提取物(骨素)、水產(chǎn)提取物、蛋白胨、肽等及研究開發(fā)一些高附加值的功能食品。溫度:50-55,PH6.0-7.0,用量:0.1-0.3%(干物重)

【醫(yī)藥工業(yè)的應(yīng)用】含中性蛋白酶的藥物,可起到消炎、利膽、止痛、助消化的功效

【紡織工業(yè)應(yīng)用】用中性蛋白酶處理過(guò)的羊毛,其抗張度比常規(guī)方法高,毛線手感柔軟,收縮性為0:還可用于蠶的脫膠和蠶絲的精煉。

【皮革工業(yè)的應(yīng)用】參考用量:皮革脫毛150-300ug皮重,皮革軟化8-15ug皮重。利用中性蛋白酶可制成脫毛劑,經(jīng)鞣制的皮革,脫毛干凈,粒而清晰,無(wú)明顯損傷,毛孔細(xì)致光亮。

【飼料工業(yè)的應(yīng)用】加入飼料配方中或直接與混合飼料混合飼喂,可提高蛋白質(zhì)的利用率和降低飼養(yǎng)成本。

艾美捷中性蛋白酶（Dispase®）是一種非哺乳動(dòng)物來(lái)源的無(wú)（AOF）金屬中性蛋白酶，通過(guò)沃辛頓開發(fā)的方法純化。其溫和的蛋白水解作用使該酶特別適用于原代細(xì)胞和二次（亞培養(yǎng)）細(xì)胞培養(yǎng)的制備，因?yàn)樗鼘?duì)細(xì)胞膜溫和。這種蛋白酶還用作細(xì)胞分離和組織解離應(yīng)用中的二級(jí)酶，通常與膠原蛋白一起使用。

中性蛋白酶（分散酶）（WBC-LS02112）的測(cè)定：

方法

在過(guò)氧化物酶偶聯(lián)系統(tǒng)中，通過(guò)測(cè)量D-丙氨酸氧化引起的A436的增加來(lái)確定反應(yīng)速度。一個(gè)單位每分鐘氧化一微摩爾的D-丙氨酸，為37°C和pH 8.3在規(guī)定條件下。

試劑

這種酶的性質(zhì)要求準(zhǔn)確制備底物。請(qǐng)注意按照以下說(shuō)明進(jìn)行操作。

1M 三重奏

緩沖液-底物（2%酪蛋白在0.05M Tris緩沖液中）：攪拌約1分鐘，將0.40gm酪蛋白（USB級(jí)或同等產(chǎn)品）溶解在0.1ml試劑級(jí)水中。加入0.1毫升2N NaOH和5.1毫升0.7M Tris。讓底物攪拌直至酪蛋白進(jìn)入溶液。pH至8.5，用稀磷酸繼續(xù)攪拌50分鐘。用試劑級(jí)水制成最終體積為0.<>ml。在移液底物之前，請(qǐng)確保底物始終均勻，并且酪蛋白沒(méi)有從溶液中掉出。如果酪蛋白似乎已從溶液中脫落，請(qǐng)勿使用底物進(jìn)行測(cè)定。

酶活化劑 - 0.01 M 氯化鈣2：溶解147毫克氯化鈣2在100毫升試劑級(jí)水中。不使用時(shí)，請(qǐng)放入冰箱。

5%TCA：將5克TCA溶解在100毫升試劑級(jí)水中。在室溫下保存。

酪氨酸標(biāo)準(zhǔn)品：在試劑級(jí)水中以10 μ摩爾/ ml的濃度制備10毫升。（181微克酪氨酸= 1微摩爾）。稱取18.1mg酪氨酸，攪拌至初始沸騰溶解于10ml試劑級(jí)水中。從火上移開并冷卻至約40°C進(jìn)行測(cè)定。

0.5 M NaOH：將 1 g. 溶解在 50 ml 試劑級(jí)水中，或從 1M 或 10M NaOH 稀釋。

Folin & Ciocalteus 苯酚試劑，使用純凈

酶

溶于濃度為5mg / ml的去離子水中，并制備1：50稀釋液。使用25μl和50μl一式兩份。

程序

要清除玻璃管，請(qǐng)使用巴斯德移液管加入 1.0 ml 緩沖底物、20 μL 0.01M CaCl 2 和兩級(jí)酶稀釋液：25μl 和 50μl，每級(jí)一式兩份。還包括兩個(gè)用于空白的無(wú)酶管，以及四個(gè)用于酪氨酸標(biāo)準(zhǔn)品的管，帶有1ml緩沖底物，以及25μl，50μl，75μl和100μl酪氨酸標(biāo)準(zhǔn)溶液。在15°C的水浴中孵育37分鐘。通過(guò)加入2ml 5%TCA停止反應(yīng)。混合每個(gè)試管，然后使用臺(tái)式 Sorvall 或等效物以 2000 rpm 離心 10 分鐘。從每個(gè)試管中取出（定量）1ml上清液，并加入標(biāo)記的干凈玻璃管中。然后在每個(gè)試管中加入2.0ml 0.5M NaOH?；旌?，然后加入0.1ml Folin-Ciacalteu試劑，550分鐘后在A10處讀取。A550 與微摩爾酪氨酸。繪制最佳擬合線并選擇落在線的線性部分內(nèi)的樣本讀數(shù)，并按下面列出的方式進(jìn)行計(jì)算。

計(jì)算

繪制酪氨酸標(biāo)準(zhǔn)品的標(biāo)準(zhǔn)曲線。在 A550 和酪氨酸微摩爾之間建立等效性。例如，使用50μl酶，稀釋50倍，A550處的讀數(shù)為0.26。從酪氨酸曲線A550的0.26相當(dāng)于0.75微摩爾酪氨酸。