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激光熒光共聚焦顯微鏡技術(shù)的主要應(yīng)用范圍

來源:Nanoscope Systems lnc   2023年02月08日 16:50  
  激光熒光共聚焦顯微鏡輸出的激光通過照明針孔反射到物鏡上,再通過分色鏡,最后聚焦在樣品表面。激光將與生物組織樣品中的熒光物質(zhì)相互作用,產(chǎn)生熒光。一些熒光信號將以與入射光路相反的方向通過物鏡,然后進(jìn)入分光鏡,最后被檢測器收集。由于針孔和樣品焦平面之間的共軛關(guān)系,焦平面外的反射信號會被針孔過濾掉,這使得共聚焦顯微鏡具有一定的色譜能力。穿過針孔的熒光信號具有很強的色譜能力。同時,由于光線強度較弱,需要使用靈敏度高的光電探測器進(jìn)行檢測。光電倍增管可以將熒光信號放大并轉(zhuǎn)換為電信號(光電探測器輸出的電信號強度與熒光強度成正比),然后傳輸給計算機,計算機通過特定的處理方法將電信號轉(zhuǎn)換為圖像信息。
  

激光熒光共聚焦顯微鏡

 

  激光熒光共聚焦顯微鏡技術(shù)的主要應(yīng)用范圍如下:
  
  1、組織和細(xì)胞中的熒光定量測定
  
  常用于單活細(xì)胞水平的定量分析,如原位雜交、腫瘤細(xì)胞凋亡觀察、DNA損傷和修復(fù)。
  
  2、細(xì)胞間通訊的研究
  
  用于研究縫隙連接通訊在胚胎發(fā)生、生殖發(fā)育、神經(jīng)生物學(xué)、腫瘤發(fā)生等過程中的基本機制和功能,也可用于鑒定對縫隙連接有潛在毒性的化學(xué)物質(zhì)。
  
  3、細(xì)胞的物理和化學(xué)測定
  
  可以定量、定性、定時、定點地測定溶酶體、線粒體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、細(xì)胞骨架、結(jié)構(gòu)蛋白、DNA、RNA、酶、受體分子等細(xì)胞內(nèi)特定結(jié)構(gòu)的含量、組成和分布。
  
  4、細(xì)胞內(nèi)鈣離子和pH值的動態(tài)分析
  
  激光熒光共聚焦顯微鏡利用熒光探針和激光掃描共聚焦顯微鏡,可以測量活細(xì)胞內(nèi)pH值和多種離子(Ca2+、K+、Na+、Mg2+)的濃度和變化。
  
  5、三維圖像的重建
  
  6、熒光漂白恢復(fù)技術(shù)
  
  經(jīng)過熒光漂白的細(xì)胞在熒光恢復(fù)過程中的變化,可以用來分析細(xì)胞的生物過程,如蛋白質(zhì)的運輸、細(xì)胞膜上受體的流動和大分子的組裝。

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