人血管平滑肌細胞的培養(yǎng)步驟和實驗方法

來源：上海一研生物科技有限公司 2023年02月09日 16:48

　　人血管平滑肌細胞是構成血管壁組織結構及維持血管張力的主要細胞成分，其結構及功能。的改變可導致細小動脈硬化甚至高血壓的發(fā)生發(fā)展。高血壓病是一種以細胞增殖。為主要病變的疾病。高血壓病時血管結構的改變主要表現(xiàn)在細胞肥大、增殖及結。締組織含量增加，中小動脈壁肥厚。

　　人血管平滑肌細胞的培養(yǎng)步驟：

　　1）復蘇細胞：將細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜，培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。

　　2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。

　　人血管平滑肌細胞的實驗方法：

　　1、分離與培養(yǎng)：麻醉后取胸主動脈及腹主動脈，將血管組織剪成小塊培養(yǎng)于含有10%血清的DMEM低糖培養(yǎng)基中。待細胞生長至融合后采用胰酶消化傳代，采用細胞進行實驗。

　　2、增殖實驗：將細胞接種至96孔板，待細胞貼壁后換用無血清的DMEM低糖培養(yǎng)基饑餓24h。采用細胞計數(shù)試劑盒測定的吸光度值，以各組吸光度值與初始吸光度的比值作為各組的相對細胞活力，并以此繪制細胞增殖曲線。

　　3、劃痕實驗：將細胞接種于12孔板，待細胞生長融合時換用無血清DMEM低糖培養(yǎng)基饑餓24h，采用無菌吸頭劃痕并采用PBS沖洗2次。換用條件培養(yǎng)基孵育24h，并拍照觀察。每組隨機取5個視野，計數(shù)遷移細胞的數(shù)目，以此判斷細胞的遷移活性。

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