飼料中維生素B2的液相色譜(HPLC)檢測方案

維生素B2又叫做核黃素，為異咯嗪衍生物，桔黃色，易被堿、光及金屬元素破壞。核黃素是許多氧化還原酶的重要組成部分，參與能量和蛋白質(zhì)代謝。動(dòng)物缺乏核黃引起體代謝紊亂。其癥狀：輕則表現(xiàn)為生長受阻，生產(chǎn)力下降，嚴(yán)重者，豬發(fā)生皮炎，形成痂皮及膿腫，眼結(jié)膜、角膜炎；母畜缺乏則出現(xiàn)早產(chǎn)，胚胎死亡及胎兒畸形；雛雞的典型癥狀為足跟關(guān)節(jié)腫脹，趾內(nèi)向彎曲成拳狀，急性缺乏癥能使腿部麻痹、癱瘓；種雞缺乏時(shí)，種蛋孵化率低，雛雞成活率低。

參考國標(biāo)（GB/T 14701-2002），利用全新高性能的LC-2010高效液相色譜儀，經(jīng)實(shí)踐檢測可提供飼料中維生素B2的HPLC檢測方案，得出的結(jié)果準(zhǔn)確可靠，檢出限好，適用于配合飼料、濃縮飼料、復(fù)合預(yù)混合飼料、維生素預(yù)混合飼料中維生素B2的測定。

高效液相色譜法對飼料中維生素B2的詳細(xì)檢測方法

二，試樣溶液的制備

稱取維生素預(yù)混合飼料0.25g-0.5g，于100ml棕色容量瓶中，加入三分之二的提取液于80-100℃水浴中煮沸30min，待冷卻后加入14ml甲醇，用提取液定容至刻度，混勻，過濾。維生素預(yù)混合飼料樣液需有提取液進(jìn)一步5倍-10倍，取部分過濾液過0.45µm濾膜過濾，高效液相色譜儀分析。

三，色譜條件

　　色譜柱： C18   150mm×4.6mm×5μm；

　　流速：1.0mL/min；

　　溫度：室溫；

　　進(jìn)樣量：20μL；

　　檢測波長：單檢維生素B2為267nm，多種維生素聯(lián)檢為280nm。

　　流動(dòng)相：在已裝入700ml去離子水的1000ml容量瓶中，加入50mgEDTA、1.1g庚烷磺酸鈉，待全溶解后，加入25ml冰乙酸、5ml三乙胺，用去離子水定容至刻度搖勻。用冰乙酸、三乙胺調(diào)解pH至3.4±0.02，過0.45µm濾膜，取該溶液860ml與140ml甲醇混合，超聲脫氣，待用。