ATCC細(xì)胞建立一套適當(dāng)?shù)霓D(zhuǎn)染方案;首先從一種標(biāo)準(zhǔn)方案開(kāi)始，然后通過(guò)改變?cè)噭?DNA的配比和形成復(fù)合物的數(shù)量進(jìn)行優(yōu)化。

轉(zhuǎn)染復(fù)合物的制備— 諸如轉(zhuǎn)染試劑/DNA配比，離子強(qiáng)度，緩沖液pH值，以及溫度等變量都會(huì)影響到轉(zhuǎn)染復(fù)合物的組成和功能。質(zhì)粒既可在無(wú)菌水又可在TE緩沖液中稀釋。如果您要使用一種市售的轉(zhuǎn)染試劑，就應(yīng)當(dāng)仔細(xì)閱讀該試劑所提供的使用說(shuō)明。需要對(duì)試劑提供方給予一定的信賴;除非您有很好的理由支持您做出改變，否則就應(yīng)當(dāng)嚴(yán)格按照他們所推薦的轉(zhuǎn)染方案。在不含血清或其他蛋白的培養(yǎng)基中制備轉(zhuǎn)染復(fù)合物;如果制備復(fù)合物所使用的培養(yǎng)基含有血清，它就會(huì)對(duì)轉(zhuǎn)染產(chǎn)生抑制。

制備轉(zhuǎn)染復(fù)合物的*孵育時(shí)間是一個(gè)非常關(guān)鍵的環(huán)節(jié)，對(duì)于不同的轉(zhuǎn)染試劑而言可能差別很大。

轉(zhuǎn)染試劑/DNA配比(負(fù)載比)—所有的轉(zhuǎn)染試劑都會(huì)在某一個(gè)試劑/DNA配比時(shí)zui為有效。有時(shí)候這種*配比的所在范圍非常狹窄;而且對(duì)于每種實(shí)驗(yàn)體系都必須進(jìn)行優(yōu)化才能得到*配比。為了尋找這種*配比往往會(huì)花費(fèi)大量的時(shí)間和金錢。

除了配比的重要性之外，所加入轉(zhuǎn)染復(fù)合物量的多少也非常關(guān)鍵。

ATCC細(xì)胞形成轉(zhuǎn)染復(fù)合物所用的稀釋劑—對(duì)于多數(shù)試劑而言，很關(guān)鍵的一點(diǎn)是要使轉(zhuǎn)染復(fù)合物能在普通基礎(chǔ)培養(yǎng)基和鹽溶液中形成。

FuGENE® HD 轉(zhuǎn)染試劑則是一個(gè)例外，因?yàn)樗茉谒?、不?huì)血清的培養(yǎng)基中或含有10%血清的培養(yǎng)基中生成復(fù)合物。如果您使用的是水或含有10%血清的培養(yǎng)基，則應(yīng)保證它能適用于你特定的細(xì)胞體系。

復(fù)合物數(shù)量—對(duì)轉(zhuǎn)染細(xì)胞所用的轉(zhuǎn)染試劑/DNA復(fù)合物的量也應(yīng)當(dāng)進(jìn)行優(yōu)化。如果用量太少，那么轉(zhuǎn)染DNA的表達(dá)就太弱;如果用量太多，則可能由于細(xì)胞毒性或其他作用反而降低蛋白的表達(dá)。*用量通常都必須進(jìn)行實(shí)驗(yàn)來(lái)確定。

所需要的轉(zhuǎn)染復(fù)合物用量與所用細(xì)胞的數(shù)量相關(guān)。轉(zhuǎn)染細(xì)胞越少，所需復(fù)合物就越少。

轉(zhuǎn)染復(fù)合物的加入—有兩種替換方法可用來(lái)漿轉(zhuǎn)染復(fù)合物加入轉(zhuǎn)染細(xì)胞：1. 將復(fù)合物濃縮液逐滴加入培養(yǎng)基，或者2. 將轉(zhuǎn)染復(fù)合物先用培養(yǎng)基稀釋，然后進(jìn)行培養(yǎng)基更換操作。*種方法更簡(jiǎn)便，而第二種方法則更因?yàn)楸苊饬嗽噭┰诰植繚饩鄱a(chǎn)生毒性，所以會(huì)使結(jié)果的一致性更好。

對(duì)于諸如FuGENE® 6 轉(zhuǎn)染試劑和HD轉(zhuǎn)染試劑這類的溫和試劑而言，您可以先將轉(zhuǎn)染復(fù)合物加入培養(yǎng)容器，然后再加入用胰蛋白酶新鮮消化得到的細(xì)胞。

轉(zhuǎn)染培養(yǎng)基— 轉(zhuǎn)染過(guò)程中所使用的培養(yǎng)基對(duì)轉(zhuǎn)染效率可能會(huì)有正面或負(fù)面的影響。甚至對(duì)于基礎(chǔ)培養(yǎng)基配方而言也是如此，尤其是在培養(yǎng)基中加入牛血清的情況下。胎牛血清的存在會(huì)使多種轉(zhuǎn)染試劑的轉(zhuǎn)染效率降低. 某些公司還提供可與轉(zhuǎn)染試劑配合使用的優(yōu)化無(wú)血清轉(zhuǎn)染培養(yǎng)基。而由羅氏應(yīng)用科學(xué)部所提供的轉(zhuǎn)染試劑則無(wú)論是否存在血清都能有效轉(zhuǎn)染。

FuGENE® H D是*的能夠轉(zhuǎn)染保存在100%血清中腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)染試劑。

如果有抗生素(如，青霉素、鏈霉素、或兩性霉素B)存在的情況下培養(yǎng)ATCC細(xì)胞，則轉(zhuǎn)染有效性會(huì)降低至25%。因此，對(duì)于瞬時(shí)轉(zhuǎn)染，我們建議使用不加抗生素的培養(yǎng)基。

高密度聚乙烯Polyethylene, High Density9002-88-4

L-焦谷氨酸;L-焦性麩質(zhì)酸;L-焦性膠氨酸;L-2-吡咯烷酮-5-羧酸L-PyroglutaMic acid;L-GlutiMinic acid;GlutiMic acid;GlutaMic acid lactaM;α- AMinoglutaric acid lactaM;L-5-Oxo-2-pyrrolidine carboxylic acid;(S)-(-)-2-Pyrrolidone-5-carboxylic acid98-79-3

L-蘇氨酸;L-異赤絲藻氨基酸L-Threonine;L-β-Hydroxy-2-aMinobutyric acid;(2S,3R)-2-AMino-3-hydroxybutyric acid;(2S,3R)-(-)-Threonine72-19-5

L-甲狀腺素鈉;L-甲狀腺胺鈉;3,5,3′,5′-四碘甲狀腺-L-原氨L-Thyroxine sodiuMsalt;3,3′,5,5′-Tetraiodo-L-thyronine sodiuM salt pentahydrate;SodiuM levothyroxine;Levothyroxine sodiuM;Eltroxin;Thyroxevan;25416-65-3

L-甲狀腺素;3,5,3′,5′-四碘-L-甲狀腺原氨酸;3-[4-(4-羥基-3,5-二碘苯氧基)-3,5-二碘苯基]-L-丙氨酸L-Thyroxine;3-[4-(4-Hydroxy-3,5-diiodophenoxy)-3,5-diiodophenyl]-L-alanine;β-[(3,5-Diiodo-4-hydroxyphenoxy)-3,5-diiodophenyl]-L-alanine51-49-0

L-酪氨酸;;;L-β-對(duì)羥苯基-α-氨基丙酸;L-干酪氨基酸L-Tyrosine;(S)-2-AMino-3-(4-hydroxyphenyl)propionic acid;3-(4-Hydroxyphenyl)-L-alanine;L-α-AMino-β-p-hydroxyphenylpropionic acid;L-α-AMino- p-hydroxyhydrocinnaMic acid60-18-4

淋巴細(xì)胞分離液LyMphocyte separation Media;

麥康凱瓊脂;麥康克瓊脂Mac Conkey agar;

氟化鎂MagnesiuM fluoride;Afluon;Sellaite7783-40-6

氫氧化鎂MagnesiuM Hydroxide (AS);Marinco H1309-42-8

硬脂酸鎂MagnesiuM Stearate (AS);DoloMol577-04-0

七水合硫酸鎂Magnesium sulfate10034-99-8

三硅酸鎂;三硅酸二鎂;硅酸鎂;弗羅里硅土;硅鎂型吸附劑MagnesiuM trisilicate;MagnesiuM silicate;MagnesiuM Mesotrisillicate14987-04-3

蘋果酸Malic Acid;4455-77-0

丙二酰胺MalonaMide;PropanediaMide;108-13-4

丙二腈 99％Malonic acid141-82-2

丙二腈;氰化亞甲基;二氰甲烷;氰基乙腈;縮蘋果腈Malonitrile;Methylene cyanide;DicyanoMethane;Cyanoacetonitrile109-77-3

acid;Phenylhydroxyacetic acid;Phenylglycolic acid;α-Hydroxybenzeneacetic acid;dl-Mandelic acid90-64-2