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ECL化學(xué)化學(xué)發(fā)光底物(超敏)的操作步驟

來(lái)源:浙江聯(lián)碩生物科技有限公司   2023年03月17日 16:57  

ECL化學(xué)化學(xué)發(fā)光底物(超敏)可為使用辣根過(guò)氧化物酶(HRP)偶聯(lián)物的免疫印跡實(shí)驗(yàn)提供明亮的信號(hào)和低皮克級(jí)檢測(cè)靈敏度。 該ECL底物能夠兼容各種膜、封閉液和寬范圍抗體稀釋液,以出色性能、通用性和高性價(jià)比,滿足用戶的免疫印跡應(yīng)用需求。

操作步驟:
1、執(zhí)行常規(guī)SDS-PAGE、轉(zhuǎn)模和Western Blot步驟。 注意用HRP標(biāo)記lgG或用一抗-鏈親和素-生物素-HRP夾法。
2、Western Blot最后一次洗模的同時(shí)配置發(fā)光工作液:分別取等體積的A液和B液,放入干凈容器中混合(注意吸取A液和B液的吸頭一定要分開(kāi),避免試劑污染)。 建議立即使用工作液,室溫放置數(shù)小時(shí)后仍可使用但靈敏度有所降低。
3、Western Blot最后一次洗膜后,用鑷子將膜取出,用濾紙吸去多余的洗滌液(切勿接觸膜的蛋白面),然后置于一潔凈保鮮膜上或塑料容器內(nèi)。
4、根據(jù)膜的大小按比例滴加配置好的ECL工作液到膜上,確保工作液均勻覆蓋在膜上,放置1-3分鐘。
5、取膜,用濾紙吸去多余的液體,將膜放在兩篇保鮮膜中間,隨后進(jìn)行壓片檢測(cè)或化學(xué)發(fā)光成像儀檢測(cè)。
6、壓片檢測(cè):將膜固定于X光膠片暗盒內(nèi)(注意蛋白面向上)。 暗房?jī)?nèi)壓X光膠片,分別曝光不同的時(shí)間,如數(shù)秒到數(shù)分鐘,顯影沖洗。
7、化學(xué)發(fā)光成像儀檢測(cè):將膜放置到化學(xué)發(fā)光成像儀內(nèi),參考儀器說(shuō)明書(shū)進(jìn)行檢測(cè)。 注

意事項(xiàng): 建議第一次曝光60秒,之后可調(diào)整曝光時(shí)間以達(dá)到最佳結(jié)果。 化學(xué)發(fā)光反應(yīng)在底物孵育后的前5-30分鐘期間是強(qiáng)烈的,這一反應(yīng)可以持續(xù)幾個(gè)小時(shí),但強(qiáng)度會(huì)隨時(shí)間下降,如有底物孵育后較長(zhǎng)時(shí)間后曝光,曝光時(shí)間可能需要延長(zhǎng)以獲得較強(qiáng)信號(hào)。

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