ECL化學(xué)化學(xué)發(fā)光底物（超敏）可為使用辣根過氧化物酶（HRP）偶聯(lián)物的免疫印跡實(shí)驗(yàn)提供明亮的信號(hào)和低皮克級(jí)檢測(cè)靈敏度。 該ECL底物能夠兼容各種膜、封閉液和寬范圍抗體稀釋液，以出色性能、通用性和高性價(jià)比，滿足用戶的免疫印跡應(yīng)用需求。

操作步驟：
1、執(zhí)行常規(guī)SDS-PAGE、轉(zhuǎn)模和Western Blot步驟。 注意用HRP標(biāo)記lgG或用一抗-鏈親和素-生物素-HRP夾法。
2、Western Blot最后一次洗模的同時(shí)配置發(fā)光工作液：分別取等體積的A液和B液，放入干凈容器中混合（注意吸取A液和B液的吸頭一定要分開，避免試劑污染）。 建議立即使用工作液，室溫放置數(shù)小時(shí)后仍可使用但靈敏度有所降低。
3、Western Blot最后一次洗膜后，用鑷子將膜取出，用濾紙吸去多余的洗滌液（切勿接觸膜的蛋白面），然后置于一潔凈保鮮膜上或塑料容器內(nèi)。
4、根據(jù)膜的大小按比例滴加配置好的ECL工作液到膜上，確保工作液均勻覆蓋在膜上，放置1-3分鐘。
5、取膜，用濾紙吸去多余的液體，將膜放在兩篇保鮮膜中間，隨后進(jìn)行壓片檢測(cè)或化學(xué)發(fā)光成像儀檢測(cè)。
6、壓片檢測(cè)：將膜固定于X光膠片暗盒內(nèi)（注意蛋白面向上）。 暗房?jī)?nèi)壓X光膠片，分別曝光不同的時(shí)間，如數(shù)秒到數(shù)分鐘，顯影沖洗。
7、化學(xué)發(fā)光成像儀檢測(cè)：將膜放置到化學(xué)發(fā)光成像儀內(nèi)，參考儀器說明書進(jìn)行檢測(cè)。 注

意事項(xiàng)： 建議第一次曝光60秒，之后可調(diào)整曝光時(shí)間以達(dá)到最佳結(jié)果。 化學(xué)發(fā)光反應(yīng)在底物孵育后的前5-30分鐘期間是強(qiáng)烈的，這一反應(yīng)可以持續(xù)幾個(gè)小時(shí)，但強(qiáng)度會(huì)隨時(shí)間下降，如有底物孵育后較長(zhǎng)時(shí)間后曝光，曝光時(shí)間可能需要延長(zhǎng)以獲得較強(qiáng)信號(hào)。