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【瑞士步琦】通過(guò)SFC超臨界流體色譜分離純化甜葉菊提取物中甜菊苷的方法
分離純化甜葉菊提取物中甜菊苷
甜菊糖苷（結(jié)構(gòu)式見(jiàn)圖1 (b)）屬于甜菊醇糖苷，甜菊糖苷是甜菊屬植物的甜味來(lái)源。甜菊糖的增甜能力比蔗糖的甜度高許多倍，因此是一種糖的替代品。自 2011 年以來(lái)，甜菊糖苷已被歐盟批準(zhǔn)為食品添加劑 E960。甜葉菊本身還沒(méi)有被批準(zhǔn)作為一種食品。
本文介紹了一種使用 BUCHI Sepiatec SFC 設(shè)備從甜葉菊提取物當(dāng)中分離得到甜菊糖苷的方法。分離過(guò)程所使用食品級(jí)CO2、乙醇和水作為添加劑。
實(shí)驗(yàn)條件
設(shè)備 | Sepiatec SFC-50 |
色譜柱 | prep HPLC column Nucleodur Si 5um 250 x 4.0m |
流動(dòng)相種類 | A=CO2（100%） B=乙醇/水（95/5） |
流動(dòng)相條件 | 0-2min：95%A/5%B 2-25min：5-35%B 25-31min：35%B |
樣品 | 200mg/mL 乙醇甜葉菊提取物 |
以 95%A/5%B，4mL/min流速條件對(duì)色譜柱平衡 5min。通過(guò)自動(dòng)進(jìn)樣器進(jìn)樣并開(kāi)始運(yùn)行分離程序，UV檢測(cè)波長(zhǎng)設(shè)定為 210nm，背壓調(diào)節(jié)閥設(shè)定為 150bar，柱溫箱溫度為 40℃，得到如下分離圖譜：
▲ 圖1：(a)甜葉菊提取物的純化
以及(b)對(duì) 24 號(hào)組分進(jìn)行 HPLC 純化分析
結(jié)果與討論
圖1(a)展示了甜葉菊提取物的色譜圖，通過(guò)乙醇對(duì)甜葉菊進(jìn)行提取得到了很多化合物，甜菊糖苷作為極性分子與色譜柱的極性固定相（Slica）發(fā)生了強(qiáng)烈的相互作用。因此，當(dāng)流動(dòng)相的整體梯度極性增加是，甜菊糖苷得以被洗脫。圖1(a)表明其純度非常高。除此之外，甜菊糖苷也是提取物中甜度最高的化合物，并且可從甜菊糖總甙中的甜菊雙糖苷中分離得到。
食品性質(zhì)的物質(zhì)提純一般更偏向于使用乙醇。反相色譜所使用的典型溶劑甲醇或乙腈往往與食品特性不太符合的。由于流動(dòng)相整體極性的增加，所以水作為添加劑可以有效改善待測(cè)分析物的峰型。
結(jié)論
使用制備型 SFC 可以有效地將甜菊糖苷從甜葉菊提取物中分離得到。通過(guò) SFC 以及符合食品要求的溶劑可以對(duì)食品提取物進(jìn)行純化。
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