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在細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中血清熱滅活的作用和意義

來源:浙江聯(lián)碩生物科技有限公司   2023年03月30日 13:30  

一、血清滅活的目的是什么?

1、血清熱滅活目的主要是為了去除血清中補(bǔ)體等對(duì)熱敏感的物質(zhì),但是在胎牛血清中對(duì)補(bǔ)體的滅活則明顯沒有必要。

2、實(shí)驗(yàn)員曾對(duì)商業(yè)胎牛血清中的補(bǔ)體成分進(jìn)行測定,他們發(fā)現(xiàn)胎牛血清中含有的C1、C6僅達(dá)成年動(dòng)物血清的1-3%,而其它補(bǔ)體成分僅有成年動(dòng)物的5-50%,至于補(bǔ)體的主要成分C3在胎牛血清中則幾乎不能檢出。通過補(bǔ)體固定實(shí)驗(yàn),也未發(fā)現(xiàn)有明顯的溶血現(xiàn)象。多數(shù)實(shí)驗(yàn)室在培養(yǎng)前將培養(yǎng)液進(jìn)行預(yù)熱的過程,也對(duì)熱敏的補(bǔ)體有滅活的作用。

3、熱滅活另一個(gè)目的是為了使支原體失活。

 

二、血清使用前是否都必須熱滅活?

1、在免疫學(xué)研究、培養(yǎng)ES細(xì)胞、昆蟲細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞時(shí),推薦使用熱滅活血清。而對(duì)于其他大多數(shù)的細(xì)胞來說是不需要熱滅活血清的。

2、很多情況下,熱滅活并不會(huì)改善細(xì)胞的生長,反而會(huì)降低了支持細(xì)胞生長的能力。即使在少數(shù)有促進(jìn)的情況下,其促進(jìn)的比率也是微不足道。另外,血清的熱滅活導(dǎo)致的沉淀常常被認(rèn)為是微生物污染,從而給用戶帶來不必要的麻煩。

3、我司建議,對(duì)血清進(jìn)行滅活的用戶,需要通過試驗(yàn)來證實(shí)其必要性。

 

三、血清熱滅活應(yīng)該怎么操作?

1、融化血清,并充分混勻其內(nèi)容物。

2、對(duì)照瓶裝等量水,插入溫度計(jì)。

3、將血清瓶和對(duì)照瓶放入56℃水浴箱。

4、當(dāng)溫度達(dá)到56℃,立即開始計(jì)時(shí)。

5、每5分鐘,旋轉(zhuǎn)血清瓶一次,輕微規(guī)則搖晃,以使瓶中血清受熱均勻一致。656℃,30分鐘后,立刻去除血清。

注意事項(xiàng):血清滅活時(shí),避免接觸到加熱管,防止受熱不均勻,導(dǎo)致滅活失敗,血清滅活后,冷水浴冷卻。

 

四、為什么血清滅活后產(chǎn)生大量沉淀?

1、血清滅活后出現(xiàn)的沉淀大多數(shù)是纖維蛋白析出,屬正?,F(xiàn)象。滅活過程多次搖晃使血清受熱均勻可以降低蛋白的析出。

2、當(dāng)血清在未化凍狀態(tài)時(shí)直接置56℃水浴、滅活過程中局部受熱過高、加熱時(shí)間過長就會(huì)產(chǎn)生膠狀沉淀,這樣的血清質(zhì)量嚴(yán)重受損,是無法繼續(xù)正常使用的。


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